朱砂葉螨鈉通道基因克隆及其kdr突變研究.pdf

1、朱砂葉螨(Tetranychus cinnabarinus)是一種為害嚴(yán)重而又難以防治的重要農(nóng)業(yè)害螨，該螨世代周期短，繁殖力強(qiáng)，近親交配率高，受藥機(jī)會(huì)多，很容易產(chǎn)生抗藥性。
　　 昆蟲(螨)抗藥性是由于殺蟲劑表皮穿透性降低、解毒酶活性的增強(qiáng)和靶標(biāo)系統(tǒng)的不敏感性而引起。電壓門控鈉離子通道是DDT和擬除蟲菊酯類殺蟲劑的作用靶標(biāo)，這兩類殺蟲劑主要通過改變昆蟲神經(jīng)膜上鈉離子通道功能而起殺蟲作用。昆蟲則通過改變其鈉離子通道結(jié)構(gòu)，降低對(duì)藥劑

2、的敏感性來產(chǎn)生對(duì)DDT和擬除蟲菊酯類殺蟲劑的抗藥性。
　　 本文在室內(nèi)選育朱砂葉螨敏感品系和甲氰菊酯抗性品系的基礎(chǔ)上，監(jiān)測(cè)了該螨不同地理種群對(duì)甲氰菊酯的抗性水平，建立了朱砂葉螨實(shí)驗(yàn)種群生命表，克隆并比較了敏感和甲氰菊酯抗性品系鈉通道基因cDNA序列，解析了敏感和抗性品系鈉通道基因mRNA的表達(dá)模式。獲得如下主要結(jié)果：
　　 1.藥膜法生物測(cè)定結(jié)果表明，與敏感品系相比，朱砂葉螨室內(nèi)抗性篩選品系對(duì)甲氰菊酯的抗性達(dá)98.5倍，

3、重慶、浙江、湖北和云南地理種群的抗性水平分別為7.6、9.3、11.8和16.2倍；三種增效劑聯(lián)合(增效劑：甲氰菊酯=3:1和9:1)可抑制室內(nèi)抗性品系約50-85％的抗性。
　　 2.實(shí)驗(yàn)種群生態(tài)學(xué)研究結(jié)果表明，與敏感品系相比，室內(nèi)抗性品系存在生殖不利性，同時(shí)發(fā)育速率加快，平均世代歷期縮短。
　　 3.通過RT-PCR及RACE技術(shù)，克隆獲得敏感和甲氰菊酯抗性品系鈉通道基因(GenBank登錄號(hào)分別為：GU196305

4、和GU569881)，cDNA全長(zhǎng)5664bp，編碼1888個(gè)氨基酸，包括結(jié)構(gòu)域Ⅰ S1-IVS6；兩條基因都含有可變剪切SV1和SV2；從室內(nèi)抗性品系堅(jiān)定一個(gè)點(diǎn)突變(F1538I)，該點(diǎn)突變以不同頻率存在室內(nèi)抗性品系和不同地理種群中，但在敏感品系中的頻率為0，表明該突變是朱砂葉螨的kdr突變。
　　 4.通過Q-PCR，解析了敏感和抗性品系鈉通道基因mRNA的表達(dá)模式，結(jié)果顯示兩個(gè)抗性品系(阿維菌素抗性品系設(shè)為對(duì)照)鈉通道基因