多倍體腫瘤的發(fā)生與耐藥的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　 惡性腫瘤嚴(yán)重威脅人類健康，化療作為惡性腫瘤綜合治療中必不可少的方法，在臨床治療中發(fā)揮著重要作用。紡錘絲毒性藥物（如紫杉醇、多西他賽等）是婦科腫瘤治療中常用的一線化療藥物。在臨床工作中我們觀察到:在化療初始階段，腫瘤一般對所用藥物敏感，但在隨后的不同階段多數(shù)腫瘤會出現(xiàn)耐藥、復(fù)發(fā)，還有部分腫瘤甚至在初始治療的過程中就出現(xiàn)耐藥。
　　 腫瘤耐藥的機(jī)制是復(fù)雜多樣的，關(guān)于紡錘絲毒性藥物的耐藥機(jī)制的研究目前多集中在多藥

2、耐藥基因與腫瘤耐藥的關(guān)系方面。課題組前期研究發(fā)現(xiàn):在體外培養(yǎng)中，有些腫瘤細(xì)胞在接受紡錘絲毒性藥物治療過程中除部分以凋亡告終外，還有部分腫瘤細(xì)胞并不表現(xiàn)為凋亡現(xiàn)象，而是以形成多倍體（四倍體甚至八倍體）細(xì)胞為特征;這些多倍體腫瘤細(xì)胞不僅沒有被化療藥物所殺滅，反而在短暫調(diào)整后繼續(xù)進(jìn)行DNA的復(fù)制，他們不但可以長期存在，同時(shí)表現(xiàn)出了對多種不同作用機(jī)制的藥物更強(qiáng)的耐藥性，我們推測，這些化療篩選后的“幸存者”是腫瘤耐藥、復(fù)發(fā)的根源之一。國外的一些研

3、究也報(bào)道了相似的結(jié)果:多倍體腫瘤細(xì)胞具有高度的遺傳不穩(wěn)定性，對放化療均極不敏感，具有多倍體亞克隆的腫瘤預(yù)后更差。因此我們提出“紡錘絲毒性藥物誘導(dǎo)形成的多倍體腫瘤是耐藥的重要表現(xiàn)或又一重要機(jī)制”這一假說。
　　 課題的前期研究初步探討了多倍體腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡逃逸及耐藥的可能機(jī)制，發(fā)現(xiàn):在紡錘絲毒性藥物誘導(dǎo)產(chǎn)生多倍體腫瘤細(xì)胞過程中，凋亡通路的異常，特別是抗凋亡基因Bcl-2的異常表達(dá)起著重要的作用;在多倍體耐藥中，同樣發(fā)現(xiàn)Bcl-2

4、的異常表達(dá)起著重要的調(diào)控作用。作為紡錘絲毒性藥物發(fā)揮細(xì)胞殺傷作用的主要途徑，凋亡通路上各調(diào)控點(diǎn)的正常運(yùn)作起著至關(guān)重要的作用。有實(shí)驗(yàn)表明，Bcl-2作為凋亡的各種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的共同通路或交匯點(diǎn)，可增強(qiáng)細(xì)胞對大多數(shù)DNA損傷因子的抵抗性，抑制大多數(shù)化療藥物所引起的靶細(xì)胞凋亡。這與我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，因此提示:抗凋亡基因Bcl-2的高表達(dá)在多倍體腫瘤形成及耐藥過程中的調(diào)控作用，很可能成為后續(xù)研究對抗多倍體耐藥的重要切入點(diǎn)。
　　 那么

5、臨床中，經(jīng)紫杉醇等紡錘絲毒性藥物治療后耐藥、復(fù)發(fā)的腫瘤是否也出現(xiàn)上述變化——形成多倍體？本研究擬通過臨床腫瘤組織實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步探討經(jīng)紡錘絲毒性藥物治療后腫瘤DNA倍體的變化（多倍體腫瘤的形成）與耐藥發(fā)生的關(guān)系，及抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá)在多倍體腫瘤的形成及耐藥發(fā)生中的意義。
　　 方法:
　　 收集15例臨床經(jīng)紡錘絲毒性藥物治療前后的同一患者的腫瘤組織病理（包括復(fù)發(fā)耐藥及正在進(jìn)行新輔助化療的兩類患者），應(yīng)用熒光原位雜交技

6、術(shù)檢測經(jīng)紡錘絲毒性藥物治療前、后DNA倍體的改變情況，同時(shí)，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測化療前、后組織中抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1、復(fù)發(fā)耐藥腫瘤中DNA倍體的改變與Bcl-2的表達(dá)情況
　　 復(fù)發(fā)耐藥組共9例，與化療前相比，復(fù)發(fā)耐藥后腫瘤組織中多倍體細(xì)胞數(shù)目的增加具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）;Bcl-2在耐藥組織中的表達(dá)較化療前明顯升高，且與多倍體細(xì)胞數(shù)目的增加具有顯著的正相關(guān)關(guān)系（r

7、=0.791，P＜0.05）。
　　 2、新輔助化療組DNA倍體改變及Bcl-2表達(dá)情況
　　 新輔助化療組共6例，化療后多倍體數(shù)目增加者4例，對應(yīng)Bcl-2表達(dá)增高者3例，其中2例在隨后化療中發(fā)生耐藥（均在第7療程后出現(xiàn)耐藥）;多倍體數(shù)目未增加者2例，對應(yīng)Bcl-2表達(dá)未增高者1例。
　　 結(jié)論：
　　 1、經(jīng)紡錘絲毒性藥物治療后腫瘤的倍體變化（多倍體腫瘤的形成）可能是耐藥的重要標(biāo)志及原因之一;