鹽單胞菌鹽敏感突變株篩選及耐鹽基因克隆和序列分析.pdf

1、ConStruction0fSa我Sens遷扣eMutants仔om妣mD忍口s印TTW4andCloningandSequenceAna螂isoftheGeneInV0lvedinCeUularosmoregul撕onrfll’1’』J1上neSlSSUbmlttedtOQ砌如D內(nèi)砒亂彘優(yōu)紀廠U佗劫P戚砂InFulfillmentoftheRequirementf6rtheDegreeOfVMaSterofSCienCeZhangLi

2、n(DepalrtmentofLifeScience)SuperVisor：LuWeidongQjngdao，ChjnaJune2013青島農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文摘要摘要TTW4菌株是本實驗室從中國內(nèi)蒙古騰格里沙漠鹽湖孿生湖中分離得到的一株中度嗜鹽茵，經(jīng)過形態(tài)學，生理生化實驗和16SrDNA測序鑒定其屬于脅fDmo甩∞屬。通過紫外誘變得到其具有利福平抗性的突變株Uv1。Uvl能夠在1％到18％NaCl濃度的M63培養(yǎng)基上生長。用三親本雜交

3、的方法，通過轉座子Tn51063a隨機插入，得到W1的轉座子插入突變株，構建了一個容量為50000個突變體的庫，從庫中篩選到8株耐鹽能力下降的鹽敏感突變株。耐鹽性試驗表明，本實驗篩選得到的鹽敏感突變株都只能在NaCl濃度在15％以下的M63培養(yǎng)基上生長。Uv1與其鹽敏感突變株在DSMZ755培養(yǎng)基上生長情況良好。碘結晶法測定細菌細胞內(nèi)甜菜堿含量。W1及其鹽敏感突變株隨培養(yǎng)基中NaCl濃度升高胞內(nèi)積累的甜菜堿也相應增多，甜菜堿積累具有先增

4、多后減少的趨勢，在培養(yǎng)6小時左右出現(xiàn)峰值。W1及其鹽敏感突變株積累甜菜堿的能力有明顯差異，W1在15％NaCl濃度的Ds汜755液體培養(yǎng)基中積累的甜菜堿最多可以達到190∥mg，而鹽敏感突變株胞內(nèi)積累的甜菜堿含量有明顯的降低，一般都在150“∥mg以下，最低的只有110扯g／mg。以鹽敏感突變株S3作為克隆耐鹽基因的實驗材料。使用酶切基因組DNA自連后反向PCR的方法克隆了突變株S3中Tn5中插入位點的側翼序列。BLAST的分析測序結果