薩羅羅非魚(yú)、尼羅羅非魚(yú)AQP3 cDNA序列克隆及鹽度脅迫下組織表達(dá)特征.pdf

1、滲透壓調(diào)節(jié)是硬骨魚(yú)類調(diào)節(jié)體內(nèi)外滲透壓平衡，適應(yīng)環(huán)境變化的重要生理活動(dòng)。海水硬骨魚(yú)類通過(guò)排出多余鹽分和吸收水分來(lái)維持體內(nèi)滲透壓，而淡水硬骨魚(yú)類則通過(guò)排出多余水分和吸收環(huán)境離子來(lái)實(shí)現(xiàn)滲透壓調(diào)節(jié)。魚(yú)體內(nèi)水分和離子的轉(zhuǎn)運(yùn)是由細(xì)胞膜上多種水、離子通道蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)子共同作用實(shí)現(xiàn)的。水通道蛋白（aquaporins，AQPs）即是通道蛋白之一，在鰓、腎、腸等滲透壓調(diào)節(jié)的主要器官中都有多種水通道蛋白表達(dá)，它們不僅對(duì)水和離子轉(zhuǎn)運(yùn)起重要作用，而且還參與甘油、

2、尿素等含氮物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)，在硬骨魚(yú)類滲透壓調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。
　　為了探究水通道蛋白3（aquaporin3，AQP3）在薩羅羅非魚(yú)（Sarotherodon melanothern）、尼羅羅非魚(yú)（Oreochromis niloticus）滲透壓調(diào)節(jié)中的作用，本論文分利用cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)（Rapid amplification of cDNA ends，RACE）和反轉(zhuǎn)錄PCR（Reverse Transcription-

3、PCR，RT-PCR）技術(shù)首次克隆了薩羅羅非魚(yú)、尼羅羅非魚(yú)AQP3基因cDNA序列，并設(shè)置了淡水、15鹽度、30鹽度三個(gè)鹽度梯度，使羅非魚(yú)由淡水逐步適應(yīng)各鹽度梯度，慢性脅迫一周后進(jìn)行解剖取樣。另將部分15和30鹽度馴化一周后的羅非魚(yú)重新轉(zhuǎn)回淡水中，低鹽度脅迫一周后再取樣。利用熒光定量檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組中腦、鰓、肝、腎、胃、前腸、中腸、后腸、心、皮膚、肌肉中AQP3 mRNA相對(duì)表達(dá)量。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果：（1）薩羅羅非魚(yú)AQP3 cDNA序列全長(zhǎng)1

4、894bp，其中，開(kāi)放閱讀框（ORF）912bp，編碼303個(gè)氨基酸，5′和3′非編碼區(qū)長(zhǎng)度分別為98bp和884bp。氨基酸序列分析顯示，薩羅羅非魚(yú)AQP3與莫桑比克羅非魚(yú)（O.mossambicus）同源性最高，達(dá)94％。0、15鹽度下，鰓、肌肉、皮膚中表達(dá)水平相對(duì)較高，其他組織表達(dá)相對(duì)較低，且15鹽度中各組織的表達(dá)水平低于0鹽度；30鹽度下，各組織以腸道表達(dá)量相對(duì)最高。（2）尼羅羅非魚(yú)AQP3 cDNA序列長(zhǎng)1445bp，包括完整

5、開(kāi)放閱讀框912bp,編碼303個(gè)氨基酸。氨基酸序列分析顯示，尼羅羅非魚(yú)AQP3與莫桑比克羅非魚(yú)同源性最高，達(dá)100%。各實(shí)驗(yàn)組中鰓、肌肉、皮膚、胃中表達(dá)水平相對(duì)較高，其他組織表達(dá)相對(duì)較低。鰓、肌肉、皮膚、胃表達(dá)量隨著鹽度上升而下降，隨著鹽度的下降而上升。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，薩羅羅非魚(yú)在適應(yīng)淡水或低鹽度環(huán)境時(shí)，AQP3參與鰓、皮膚、肌肉的排水過(guò)程，在適應(yīng)高鹽度環(huán)境時(shí)，AQP3參與腸道的水分吸收。在尼羅羅非魚(yú)適應(yīng)淡水或低鹽度環(huán)境時(shí)，AQP3參與