EPO-TAT融合蛋白的神經(jīng)保護(hù)作用及對(duì)Akt、ERK通路的影響.pdf

1、目的：近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，促紅細(xì)胞生成素(EPO)是一個(gè)具有神經(jīng)保護(hù)的體液因子，各種體內(nèi)和體外試驗(yàn)已經(jīng)證明EPO具有明確的神經(jīng)保護(hù)作用。但是由于EPO是大分子蛋白質(zhì)物質(zhì)，很難穿過(guò)血腦屏障，限制了EPO的臨床應(yīng)用。EPO—TAT是利用蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)新合成的一種融合蛋白，可以高效、快速的穿過(guò)血腦屏障，減少用藥量，提高神經(jīng)保護(hù)作用。本研究的目的是研究EPO—TAT是否具有神經(jīng)保護(hù)作用并探索其是否通過(guò)Akt、ERK通路發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。 方法

2、：研究采用大鼠大腦中動(dòng)脈線(xiàn)栓模型，共設(shè)5組，每組7只大鼠：A組，假手術(shù)組；B組，生理鹽水的對(duì)照組；C組，小劑量rhEPO(1U/g)實(shí)驗(yàn)組；D組，大劑量rhEPO(5U/g)實(shí)驗(yàn)組；E組，EPO—TAT融合蛋白(1U/g)實(shí)驗(yàn)組。給藥的方法為再灌注即刻和再灌注后24小時(shí)腹腔注射藥物。研究的主要觀(guān)察指標(biāo)為大鼠再灌注48小時(shí)時(shí)的腦梗死體積、神經(jīng)功能評(píng)分、TUNEL染色凋亡細(xì)胞統(tǒng)計(jì)和HE染色，大鼠再灌注24小時(shí)、48小時(shí)的Akt、ERK的活化

3、程度。腦梗死體積采用TTC染色法，并用Image—ProPlus軟件分析。神經(jīng)功能評(píng)分采用12分評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)。Akt、ERK活化程度采用WesternBlotting和石蠟切片免疫組化。 結(jié)果：神經(jīng)功能評(píng)分顯示，rhEPO低劑量組與對(duì)照組的神經(jīng)功能評(píng)分沒(méi)有明顯差異，而rhEPO高劑量組和EPO—TAT組與對(duì)照組相比，具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。腦梗死體積分析顯示，rhEPO低劑量組與對(duì)照組的腦梗死體積相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，rh

4、EPO高劑量組和EPO—TAT組與對(duì)照組相比，具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，這說(shuō)明EPO—TAT具有針對(duì)局部缺血損傷的保護(hù)作用。TUNEL染色計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組和rhEPO低劑量組的TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞明顯多于rhEPO高劑量組和EPO—TAT組，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。說(shuō)明，高劑量的rhEPO和EPO—TAT均可減少細(xì)胞凋亡，保護(hù)神經(jīng)元。WesternBlot顯示，大劑量rhEPO治療組和EPO—TAT融合蛋白實(shí)

5、驗(yàn)組缺血側(cè)皮質(zhì)和基底節(jié)的pAkt和pERK活性顯著高于生理鹽水對(duì)照組和小劑量rhEPO實(shí)驗(yàn)組，差異有顯著性(p＜0.05)。免疫組化也發(fā)現(xiàn)，高劑量rhEPO組和EPO—TAT組的pAkt、pERK陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯多于對(duì)照組和低劑量rhEPO組，且具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，這與westernblot中的結(jié)果相吻合。 結(jié)論：研究顯示EPO—TAT對(duì)急性腦梗塞，可以減小腦梗死體積，改善神經(jīng)功能評(píng)分，減少細(xì)胞凋亡，有保護(hù)作用，