硫酸鎳致雌性小鼠卵巢早衰毒作用及其機制的實驗研究.pdf

1、目的：探討腹腔注射硫酸鎳(NiSO<,4>)誘發(fā)雌性小鼠丘腦及卵巢損傷的毒作用及其機制，為研究鎳毒性導(dǎo)致的卵巢早衰提供科學(xué)依據(jù)。 方法：昆明種健康雌性小鼠 48 只，按體重分層隨機分為4組，染毒劑量的選擇依據(jù)小鼠NiSO<,4>腹腔注射染毒LD<,50>(40mg/kg)的1/16、1/8、1/4的近似值進行：對照組(NS組)，染毒低、中、高劑量組(2.5、5.0、10.0mg/kg組)。對照組以生理鹽水(NS)、染毒組以不同濃

2、度硫酸鎳溶液等比例，0.2ml/10g動物體重等體積腹腔注射，1次/d，連續(xù)12d。采用細(xì)胞貼片及HE組織病理切片觀察小鼠丘腦及卵巢細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；用美籃染色法檢測陰道上皮脫落細(xì)胞，觀察小鼠動情周期變化；流式細(xì)胞儀檢測分析小鼠丘腦及卵巢細(xì)胞增殖周期各時相細(xì)胞比例及DNA含量；免疫組織化學(xué)法測定小鼠卵巢P<,53>、P<,16>、Bcl-2蛋白的表達情況。 結(jié)果：(1)染毒組細(xì)胞貼片光學(xué)顯微鏡可觀察到卵巢細(xì)胞凋亡的組織形態(tài)學(xué)變化；

3、HE染色顯示卵巢組織皮質(zhì)變薄，間質(zhì)增多，卵泡數(shù)量減少，部分血管擴張；細(xì)胞核染色質(zhì)分布不均勻且有細(xì)胞碎片出現(xiàn)；HE切片中可見小鼠丘腦細(xì)胞體積增大腫脹，染色質(zhì)疏松呈網(wǎng)狀，嗜堿性減弱，細(xì)胞染色呈藍色，有些細(xì)胞膜不完整，細(xì)胞核破碎內(nèi)容物外溢，未見明顯細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)特征。(2)腹腔注射硫酸鎳染毒可導(dǎo)致小鼠動情周期紊亂，染毒組小鼠動情間期延長且不規(guī)則。 (3)流式細(xì)胞儀對小鼠卵巢細(xì)胞周期研究結(jié)果顯示：不同劑量組小鼠卵巢細(xì)胞增殖周期各期細(xì)胞分布呈現(xiàn)G

4、<,0>/G<,1>期細(xì)胞阻滯和G<,2>/M、S期細(xì)胞比例下降；高劑量組G<,1>峰前出現(xiàn)凋亡峰(Ape峰)/亞二倍體峰(sub-G<,1>)，隨劑量增加各組卵巢細(xì)胞凋亡率增加；細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)降低；異倍體指數(shù)(D．I．)增加。(4)流式細(xì)胞儀對小鼠丘腦細(xì)胞增殖周期分析顯示隨染毒劑量增加，小鼠丘腦細(xì)胞呈現(xiàn)G<,0>/G<,1>期細(xì)胞阻滯和G<,2>/M、S期細(xì)胞比例下降；細(xì)胞增殖指數(shù)(PI)降低。(5)免疫組化結(jié)果顯示P<,53>

5、及Bcl-2蛋白的表達隨染毒劑量增加而降低，各劑量組與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，P<,16>蛋白的表達隨染毒劑量增加而增高，各劑量組與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論：腹腔注射硫酸鎳染毒可誘發(fā)小鼠卵巢早衰，其機制與硫酸鎳引起雌性小鼠丘腦一卵巢軸、生殖系統(tǒng)損傷有關(guān)；其損傷作用與硫酸鎳調(diào)控細(xì)胞周期和誘導(dǎo)卵巢細(xì)胞凋亡有關(guān)；小鼠卵巢細(xì)胞凋亡可能與腹腔染毒NiSO<,4>引起卵巢細(xì)胞P<,53>、Bcl