致康膠囊對(duì)葡聚糖硫酸鈉所致小鼠結(jié)腸炎的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、本文分為以下幾個(gè)部分:
　　第一部分:
　　目的:鑒定致康膠囊中主要化學(xué)活性成分及其具體含量。
　　方法:將0.4g致康膠囊粉末溶于50ml甲醇中，超聲作用40min,0.45um的濾器過(guò)濾2次，然后用于檢測(cè)分析。采用高效液相色譜的方法分析致康膠囊中的化學(xué)活性成分。質(zhì)譜條件：流速1.0ml/min,色柱TC-C18（4.6×150mm,5um）,溫度30度。流動(dòng)相包括甲醇（A）和水（B）。梯度洗脫條件：10-90％A，

2、60min;90%A,60-75min。上樣體積為10ul。檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。
　　結(jié)果:鑒定出致康膠囊中十種主要的化學(xué)活性成分及其含量，分別是：三七素0.42mg/g,甘草酸0.37mg/g,歐前胡素0.041mg/g,黃連素4.58mg/g，異歐前胡素0.026mg/g,大黃酸0.40mg/g,蘆薈大黃素0.162mg/g,大黃素0.347mg/g,大黃酚0.617mg/g,大黃素-甲醚0.282mg/g.三七素來(lái)源于三七

3、。甘草酸來(lái)源于甘草。歐前胡素和異歐前胡素來(lái)源于白芷。黃連素來(lái)源于黃連。大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素、大黃酚和大黃素-甲醚來(lái)源于大黃。
　　結(jié)論:致康膠囊主要包含三七素,甘草酸,歐前胡素,黃連素，異歐前胡素,大黃酸,蘆薈大黃素,大黃素,大黃酚,大黃素-甲醚這十種重要的化學(xué)活性成分。
　　第二部分:
　　目的:研究致康膠囊對(duì)葡聚糖硫酸鈉所致小鼠結(jié)腸炎的作用。
　　方法:用濃度為3%葡聚糖硫酸鈉喂養(yǎng)C57BL/6小鼠一周

4、來(lái)制造實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎模型。將60只小鼠隨機(jī)分成對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組、致康膠囊低劑量組、致康膠囊中劑量組和致康膠囊高劑量組一共六組來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。觀察小鼠的體重變化、大便及血便情況，并對(duì)每組小鼠進(jìn)行疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分。評(píng)估小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度、結(jié)腸炎癥以及潰瘍情況。對(duì)小鼠結(jié)腸病理切片行HE染色，評(píng)估結(jié)腸腸上皮的損傷情況以及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況，并對(duì)小鼠結(jié)腸行組織學(xué)活動(dòng)度評(píng)分。應(yīng)用生化試劑盒檢測(cè)小鼠結(jié)腸組織中髓過(guò)氧化物酶的活性。
　　結(jié)果:模型

5、組小鼠體重下降最快，致康膠囊干預(yù)組小鼠體重下降相比模型組緩慢；致康膠囊高劑量組體重下降相比致康膠囊低劑量組緩慢。模型組小鼠出現(xiàn)便血；致康膠囊高劑量組大便成形，無(wú)明顯出血；致康膠囊中劑量組大便不成形，帶血絲；致康膠囊低劑量組大便不成形，有血便。疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分在模型組最高（8.60±0.96）；在致康膠囊高劑量組明顯偏低（1.50±0.52）；致康膠囊低劑量組（7.40±0.96）和致康膠囊中劑量組（4.70±0.94）居中。模型組小鼠結(jié)

6、腸長(zhǎng)度最短；陽(yáng)性藥物對(duì)照組和致康膠囊高劑量組小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度明顯偏長(zhǎng)；而致康膠囊低劑量組和致康膠囊中劑量組小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度居中。小鼠結(jié)腸病理切片HE染色提示模型組小鼠結(jié)腸上皮結(jié)構(gòu)損傷明顯，且結(jié)腸炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)嚴(yán)重；應(yīng)用致康膠囊干預(yù)的三組小鼠結(jié)腸上皮結(jié)構(gòu)損傷相對(duì)偏少，結(jié)腸炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度相對(duì)減輕；且致康膠囊對(duì)結(jié)腸的保護(hù)作用呈現(xiàn)出劑量依賴性。小鼠結(jié)腸行組織學(xué)活動(dòng)度評(píng)分顯示，模型組評(píng)分明顯偏高（4.80±1.03），致康膠囊高劑量組和中劑量組評(píng)分明顯偏

7、低（高劑量組：2.30±1.16；中劑量組：3.30±1.49）。對(duì)照組中小鼠結(jié)腸組織中髓過(guò)氧化物酶的活性最低，模型組中髓過(guò)氧化物酶的活性最高，而在陽(yáng)性藥物對(duì)照組和致康膠囊干預(yù)組中髓過(guò)氧化物酶的活性均有不同程度的降低。
　　結(jié)論:致康膠囊對(duì)葡聚糖硫酸鈉所致小鼠結(jié)腸炎有治療作用，能夠緩解小鼠結(jié)腸的炎癥、水腫和潰瘍，有利于結(jié)腸炎的恢復(fù)和好轉(zhuǎn)。
　　第三部分:
　　目的:探索致康膠囊治療葡聚糖硫酸鈉所致小鼠結(jié)腸炎的潛在機(jī)制。

8、
　　方法:用3%葡聚糖硫酸鈉喂養(yǎng)C57BL/6小鼠一周來(lái)制造實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎模型。將60只小鼠隨機(jī)分成對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組、致康膠囊低劑量組、致康膠囊中劑量組和致康膠囊高劑量組共六組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。ELISA的方法檢測(cè)小鼠血清中TNF-α,IFN-γ,IL-1β,IL-12,IL-4和IL-10等指標(biāo)。生化試劑盒用于檢測(cè)SOD,MDA,NO和caspase-3等指標(biāo)。免疫組化的方法檢測(cè)結(jié)腸iNOS,ICAM-1和NF-KB的表達(dá)

9、情況。WB的方法檢測(cè)結(jié)腸組織中TLR4，MyD88和TRAF6的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:致康膠囊能明顯抑制促炎因子（TNF-α,IFN-γ,IL-1β和IL-12）的表達(dá)，增加抗炎因子（IL-4和IL-10）的表達(dá)。致康膠囊能增加SOD的活性，減少M(fèi)DA和NO的含量，減少結(jié)腸組織中iNOS，ICAM-1和NF-KB的表達(dá)。另外，致康膠囊能抑制結(jié)腸組織caspase-3的活性，同時(shí)還能抑制MyD88依賴的TLR4信號(hào)通路的活性。<