苦豆子總堿治療葡聚糖硫酸鈉致急性期潰瘍性結(jié)腸炎小鼠作用機制研究.pdf

1、潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)是一種病因未明的非特異性腸道炎癥件病變,以腹瀉、腹痛、里急后重和粘液膿血便等為主要癥狀。世界范圍內(nèi),UC的發(fā)病率波動在0.5-24.5/105,近年來我國的發(fā)病率已達到11.6/105,并逐年上升。UC病理變化很復(fù)雜,按其發(fā)生、發(fā)展過程及內(nèi)鏡下表現(xiàn),分為急性期和慢性期。UC急件期(活動期)發(fā)作,若得到控制,其癥狀緩解并治愈,若失治誤治,炎癥反復(fù)發(fā)作,則轉(zhuǎn)變成慢性,其中有5-10％

2、的UC患者易發(fā)生癌變,而病程在25年以上者癌變率高達40％。因此,急性期UC的治療對于防止其慢性化及癌變有重要意義,但臨床上至今沒有特異性根治措施。所以UC已被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治病之一。
　　 中藥苦豆子(Sophora alopecuroides,L)為豆科槐屬植物,民間廣泛用于治療腸炎腹瀉。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)苦豆子總生物堿(total alkaloids of Sophoraalopecuroides,TASA)是苦

3、豆子治療UC的主要活性部位(已取得國家專利“苦豆子總生物堿在制備治療UC藥物中的應(yīng)用及結(jié)腸靶向制劑的制備方法”(ZL200410052029.0),擁有自主知識產(chǎn)權(quán))。初步臨床研究表明TASA治療UC的總有效率達67.2％。動物實驗發(fā)現(xiàn),TASA能顯著改善三硝基苯磺酸(TNBS)和葡聚糖硫酸鈉(DSS)致慢性UC的模型動物便血等一般體征,抑制體重下降,緩解結(jié)腸粘膜炎癥；能夠使免疫抑制小鼠體重增加,胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)增加；初步研究其作用機

4、制可能通過調(diào)節(jié)炎癥因了CD4＋CD25＋、CD8＋CD28-Tregs比例、IL-10、ICAM-1、MIF、TFF3等實現(xiàn)。但前期研究主要局限在慢性UC上,對急性或慢性急性發(fā)作的活動性UC未進行深入研究。
　　 目前,腸粘膜免疫功能紊亂介導(dǎo)的促炎細胞因了與抗炎細胞因子之間的平衡失調(diào)在UC中的作用日益受到重視。腸粘膜免疫功能異常,腸粘膜發(fā)生炎癥,腸粘膜固有層單個核細胞(LPMC)異常激活,產(chǎn)生大量炎性細胞因了(如IL-1β、IL

5、-6、TNF-a等),而抗炎細胞因子(如IL-4、IL-10)等表達減少,細胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡,炎癥持續(xù)發(fā)展。細胞因了進一步激活炎癥細胞內(nèi)的炎癥信號分子(如NF-kB和STAT等),啟動并調(diào)節(jié)炎癥因子的表達。IL-6/JAK/STAT是近年來研究比較多的一條信號通路,它與多種細胞因子、生長因子的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān),可以調(diào)控人體炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)以及細胞的生長、分化等。已有研究表明UC患者腸黏膜STAT3表達增加且活化增強,但其具體作用機制未明。<

6、br>　　 目的:探討TASA對葡聚糖硫酸鈉(dextran Sulfate sodium,DSS)誘導(dǎo)的小鼠急性期UC的治療作用及其對細胞因子IL-1β、IL-4和IL-6的影響,檢測UC小鼠腸黏膜STAT3的表達和活化水平,同時檢測IL-6的表達,探討IL-6/STAT3信號通路在UC發(fā)病中的調(diào)節(jié)機制及TASA對該通路的影響。
　　 方法:60只C57BL/6小鼠隨機分為正常組(Control),模型組(DSS),柳氮磺嘧

7、啶(SASP:520 mg-kg-1),TASA高、中、低劑量組(TAH、TAM、TAL:80、40、20 mg-kg-1)。Control組飲用蒸餾水。DSS組和治療組自由飲用5％DSS7 d以產(chǎn)生急性期UC模型,造模同時治療組灌服相應(yīng)藥物。Control組和DSS組灌服等體積生理鹽水。每日觀察小鼠進食、飲水、活動、毛色等一般情況,稱量體重,觀察糞便性狀、大便隱血及便血情況,進行疾病活動指數(shù)評分(DAI),觀察小鼠結(jié)腸粘膜的大體形態(tài)和

8、組織病理學(xué)變化,行組織學(xué)評分；通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)觀察TASA對急性期UC小鼠血清細胞因子IL-1β、IL-4和IL-6表達的影響；用免疫組織化學(xué)法和Western blotting法檢測各組結(jié)腸粘膜IL-6、STAT3和p-STAT3蛋白的定位分布及表達。
　　 結(jié)論:1.TASA對DSS誘導(dǎo)的急性期UC有一定治療作用,可有效減輕其腹瀉、便血、體重下降等癥狀,使腸粘膜組織炎癥好轉(zhuǎn),減輕其DAI評分和組織學(xué)評分。2.

9、DSS誘導(dǎo)的急性期UC小鼠腸粘膜存在著促炎因子升高,抗炎因子表達降低等細胞因子表達失衡的狀況,TASA可顯著降低促炎因子lL-1β和IL-6的表達,升高抗炎因子IL-4水平,調(diào)節(jié)細胞因子網(wǎng)絡(luò)平衡,促進腸粘膜的炎癥恢復(fù)。3.DSS急性期UC小鼠腸黏膜中IL-6、STAT3、p-STAT3表達增加,活化增強；且以p-STAT3核內(nèi)的增加量最為顯著,說明STAT3在UC急性期被上游因子IL-6活化而磷酸化移位至細胞核,而給予TASA治療后IL