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文檔簡介
1、背景:炎癥性腸病(IBD),包括慢性復發(fā)性炎癥疾病,克羅恩病(CD)和潰瘍性結腸炎(UC),是一種病因和發(fā)病機制都尚未完全明確的非特異炎癥性疾病。近年來,在世界范圍內,IBD的發(fā)病率和死亡率逐年上升。該病病理變化復雜,臨床癥狀多樣,若未及時得到緩解及治愈,引發(fā)為癌變的可能性極大。因此,被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治疾病之一。
目前該疾病認為是環(huán)境、遺傳、腸道共生菌、免疫等多因素共同作用所致,其中免疫功能紊亂被認為是重要的因素之一。
2、Toll樣受體-4(TLR4)是一種重要的病原模式識別受體(PRR),在啟動固有免疫時發(fā)揮重要作用,且是連接固有免疫和獲得性免疫的橋梁,被稱作是炎癥反應的閘門。近年來,TLR4信號通路在IBD中的作用被廣泛研究,其過度激活會導致免疫反應的異常調節(jié),從而產生持續(xù)擴大的炎癥反應。
脂多糖(lipo poly saccharide,LPS),TLR4重要配體之一,是一種革蘭陰性菌細胞壁中的一種成分,也是一個促炎性因子,當其與TLR4
3、結合時,會啟動TLR4的一系列通路,激活固有免疫應答,引起炎癥反應。但近期有研究表明,LPS在葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導的IBD模型中,對IBD有一定的保護作用,具體作用機制尚不清楚。
目的:本課題通過研究不同劑量的LPS對DSS誘導的IBD作用,觀察LPS在DSS誘導的IBD模型中的抗炎作用及機制;通過組織病理學分析觀察各組小鼠結腸的病理損傷變化,采用流式細胞術(FACS)檢測樹突狀細胞(DC)表型的變化,Westernbl
4、ot及聚合酶鏈式反應(PCR)的方法分別檢測相關組織中TLR4及其下游信號通路相關蛋白及基因的表達變化,探討不同劑量的LPS對DSS誘導的IBD的作用機制,闡明LPS對IBD是否有保護作用及其可能的機制。
方法:首先,將LPS分為單次給予組及多次給予組,其中LPS單次給予組在給小鼠飲用3%DSS前的第7天分別每只腹腔注射,LPS多次給予組在給小鼠飲用3%DSS前的第7天和第0天分別每只腹腔注射,注射劑量為10μg/只。
5、 其次,在Balb/c小鼠體內建立DSS誘導的IBD模型,連續(xù)造模7天后,通過每天觀察小鼠的體重變化、死亡情況、糞便狀態(tài)等指標以及結腸組織的病理學損傷分析來探討不同劑量的LPS對DSS誘導的IBD模型的作用。
再次,通過采用流式細胞術檢測樹突狀細胞(DC)表型的變化,Westernblot及聚合酶鏈式反應(PCR)分析TLR4及其下游信號通路相關蛋白及基因的表達變化來探討不同劑量的LPS對DSS誘導的IBD的作用機制。
6、> 結果:LPS單次給予組表現(xiàn)出對DSS誘導的IBD模型有一定的保護作用,可以減輕結腸的炎癥反應。與模型對照組和LPS多次給予組相比,LPS單次給予組小鼠的體重下降和DAI評分均較低;結腸組織的病理學分析顯示,LPS單次給予組的小鼠,結腸粘膜的炎性細胞浸潤程度較模型對照組和LPS多次給予組輕;而且,經LPS單次處理的IBD小鼠DC表面低表達CD86和MHC-Ⅱ共刺激分子,TLR4蛋白及下游信號通路相關基因的表達量也均下調。
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