丙酸睪酮治療小鼠自身免疫性卵巢早衰及其機制的研究.pdf

1、第一章自身免疫性卵巢早衰動物模型的建立及其胸腺、卵巢組織Foxp3的表達。
　　 目的：建立并評估自身免疫性卵巢早衰小鼠動物模型，初步了解其卵巢及胸腺組織中Foxp3的表達情況。
　　 方法：將30只C57BL/6近交系雌性小鼠隨機分為POF模型組、佐劑對照組及空白對照組，每組10只。參照付莉等人報道的方法建立自身免疫性POF小鼠模型：模型組小鼠雙側后腳掌掌心處皮下注射CFA-pZP3(完全弗氏佐劑-小鼠透明帶3多肽)混

2、合液0.1ml(每側0.05ml)；佐劑對照組同法注射CFA-三蒸水混合液0.1ml；空白對照組同法注射三蒸水0.1ml。取陰道脫落細胞涂片觀察小鼠性周期變化；免疫后第14天取外周血并處死小鼠，取卵巢及胸腺組織待測。ELISA法測定各組小鼠外周血清抗透明帶抗體濃度；HE染色觀察各組小鼠卵巢生長卵泡比例；免疫組織化學法檢測各組小鼠卵巢CD45的表達了解自身免疫性卵巢炎的發(fā)生情況。建模成功后采用免疫組織化學法檢測各組小鼠卵巢及胸腺組織中Fo

3、xp3的表達情況。
　　 結果：
　　 1、POF模型組小鼠經皮下注射后性周期紊亂率、外周血清抗透明帶抗體平均濃度及自身免疫性卵巢炎發(fā)生率均明顯高于佐劑對照組及空白對照組(P<0.01)；POF模型組小鼠卵巢生長卵泡比例明顯低于佐劑對照組及空白對照組(P<0.01)。佐劑對照組與空白對照組小鼠上述指標均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　 2、POF模型組小鼠胸腺、卵巢Foxp3免疫組化平均積分及陽性表達率均明顯

4、低于佐劑對照組及空白對照組(P<0.05)；佐劑對照組與空白對照組小鼠胸腺、卵巢Foxp3免疫組化積分及陽性表達率均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　 結論：
　　 1、小鼠透明帶3片段可以成功誘導自身免疫性卵巢早衰動物模型；
　　 2、自身免疫性卵巢早衰小鼠胸腺及卵巢組織中Foxp3的表達均明顯下降。
　　 第二章不同濃度丙酸睪酮對小鼠自身免疫性卵巢早衰的治療作用。
　　 目的：探討不同濃度丙

5、酸睪酮對小鼠自身免疫性卵巢早衰的治療作用。
　　 方法：將50只C57BL/6近交系雌性小鼠隨機分為低、中、高劑量丙酸睪酮治療組，糖皮質激素治療組及模型對照組，每組10只。各組小鼠均按第一部分方法建立POF模型；于免疫后第14天開始各丙酸睪酮治療組小鼠每天分別腹腔注射丙酸睪酮注射液0.02mg，0.1mg，0.5mg，糖皮質激素治療組每天腹腔注射地塞米松磷酸鈉注射液0.2mg，模型對照組每天腹腔注射生理鹽水0.1ml，均持續(xù)2周

6、。取陰道脫落細胞涂片觀察小鼠性周期變化；ELISA法測定各組小鼠外周血清抗透明帶抗體濃度；HE染色觀察各組小鼠卵巢生長卵泡比例；免疫組織化學法檢測各組小鼠卵巢CD45的表達了解自身免疫性卵巢炎的發(fā)生情況。
　　 結果：中劑量丙酸睪酮治療組及糖皮質激素治療組性周期紊亂率、血清抗透明帶濃度及自身免疫性卵巢炎發(fā)生率明顯低于模型對照組(P<0.05)，生長卵泡比例明顯高于模型對照組(P<0.05)；低、高劑量治療組性周期紊亂率、血清抗透

7、明帶濃度明顯高于中劑量治療組(P<0.05)，生長卵泡比例明顯低于中劑量治療組(P<0.05)；中劑量丙酸睪酮治療組與糖皮質激素治療組間上述各指標均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　 結論：中劑量丙酸睪酮可以改善小鼠自身免疫性卵巢早衰。
　　 第三章丙酸睪酮治療小鼠自身免疫性卵巢早衰的機制。
　　 目的：從AR及Foxp3的表達情況探討丙酸睪酮治療小鼠自身免疫性卵巢早衰的機制。
　　 方法：將40只C5

8、7BL/6近交系雌性小鼠隨機分為丙酸睪酮治療組，拮抗劑氟他胺治療組，拮抗劑氟他胺+丙酸睪酮治療組和模型對照組，每組10只。各組小鼠均按第一部分方法建立POF模型；于免疫后第14天開始各組小鼠每天分別腹腔注射丙酸睪酮注射液0.1mg，氟他胺0.5mg，丙酸睪酮注射液0.1mg+氟他胺0.5mg；模型對照組及空白對照組每天腹腔注射生理鹽水0.1ml，均持續(xù)2周。取陰道脫落細胞涂片觀察小鼠性周期變化；ELISA法測定各組小鼠外周血清抗透明帶抗

9、體濃度；HE染色觀察各組小鼠卵巢生長卵泡比例；免疫組織化學法檢測各組小鼠卵巢CD45的表達了解自身免疫性卵巢炎的發(fā)生情況；免疫組織化學法檢測各組小鼠胸腺AR、Foxp3及卵巢Foxp3的表達情況；Western-Blot法檢測各組小鼠胸腺AR、Foxp3蛋白的表達情況；Real-time PCR法檢測各組小鼠胸腺AR、Foxp3mRNA的轉錄情況。
　　 結果：
　　 1、丙酸睪酮治療組小鼠性周期紊亂率、血清抗透明帶濃度

10、及自身免疫性卵巢炎發(fā)生率明顯低于模型對照組(P<0.05)，生長卵泡比例明顯高于模型對照組(P<0.05)；氟他胺治療組、丙酸睪酮+氟他胺治療組小鼠性周期紊亂率、血清抗透明帶濃度及自身免疫性卵巢炎發(fā)生率明顯高于丙酸睪酮治療組(P<0.05)，生長卵泡比例明顯低于丙酸睪酮治療組(P<0.05)；氟他胺治療組及丙酸睪酮+氟他胺與模型對照組比較上述指標均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　 2、丙酸睪酮治療組小鼠胸腺AR蛋白相對表達量

11、、mRNA的表達量均明顯高于模型對照組(P<0.05)；氟他胺治療組及丙酸睪酮+氟他胺AR mRNA表達量明顯低于丙酸睪酮治療組(P<0.05)；氟他胺治療組及丙酸睪酮+氟他胺與模型對照組比較上述指標均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；各組間AR陽性表達率及免疫組化積分無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　 3、丙酸睪酮治療組小鼠胸腺Foxp3陽性表達率、免疫組化積分、蛋白相對表達量、mRNA的表達量均明顯高于模型對照組(P<0.05

12、)；丙酸睪酮+氟他胺及氟他胺治療組上述指標均明顯低于丙酸睪酮治療組(P<0.05)；氟他胺治療組及丙酸睪酮+氟他胺與模型對照組比較上述指標均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　 4、丙酸睪酮治療組小鼠卵巢Foxp3陽性表達率、免疫組化積分均明顯高于模型對照組(P<0.05)；丙酸睪酮+氟他胺及氟他胺治療組上述指標均明顯低于丙酸睪酮治療組(P<0.05)；氟他胺治療組及丙酸睪酮+氟他胺與模型對照組比較上述指標均無統(tǒng)計學差異(P>0