補腎活血湯含藥血清對體外培養(yǎng)自身免疫性卵巢早衰小鼠Treg細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:通過體外培養(yǎng)自身免疫卵巢早衰小鼠調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的生成，觀察補腎活血湯含藥血清對CD4+CD25+Treg細(xì)胞的增殖作用。
　　方法:以A/J雄鼠和C57BL/6雌鼠進行雜交繁殖，成功獲得健康的B6AF1小鼠。篩選性周期正常的30只雌性小鼠，隨機分2組:其中模型組20只，正常組10只。模型組小鼠經(jīng)尾根和左后腳掌皮下注射ZP3多肽進行自身免疫性卵巢早衰小鼠造模，每只小鼠多點注射總量為0.1ml（由pZP3+ CFA混合而成）。造模

2、2周后，從模型組和正常組中各取6只小鼠，眼球取血后ELISA測定血清E2含量;取胸腺、脾臟、子宮及雙側(cè)卵巢標(biāo)本，予以稱重后計算臟器指數(shù);陰道脫落細(xì)胞巴氏染色及子宮與卵巢HE染色后觀察組織形態(tài)學(xué)變化來綜合來評判造模成功情況。選擇Wistar大鼠8只，隨機分為空白對照組、補腎活血湯高、中、低劑量組，每組2只?？瞻讓φ战M大鼠給予雙蒸水(20 ml/kg)，中藥組分別予以補腎活血湯高、中、低劑量（20g/kg、10g/kg、5g/kg）予以灌胃

3、。第7天給藥后1h經(jīng)腹主動脈采血，取得含藥血清。免疫磁珠法分離脾臟CD4+CD25+Treg，流式細(xì)胞術(shù)檢測純度后以相應(yīng)的含藥血清培養(yǎng)。CCK-8法及CFSE標(biāo)記細(xì)胞檢測CD4+CD25+Treg增殖情況。
　　結(jié)果:1、造模后，根據(jù)小鼠臟器指數(shù)、血清E2水平及子宮卵巢組織病理的變化，顯示免疫性卵巢早衰小鼠模型建立成功。
　　2、各實驗組對CD4+CD25+Treg的增殖均有作用，含藥血清組較PBS組顯著升高。中劑量血清組增