自身免疫性卵巢早衰的診斷與治療的研究.pdf

1、目的：探討自身免疫性POF的免疫學診斷方法；建立自身免疫性POF動物模型，采用糖皮質激素和雄激素治療自身免疫性POF模型小鼠為臨床治療提供理論依據。 方法：分三個部分進行。 第一部分自身免疫性卵巢早衰的診斷的研究：52例卵巢早衰并不孕癥患者為研究組，20例其他原因不孕癥患者為對照組，分別檢查血清抗核抗體，抗卵巢組織抗體，抗心磷脂抗體，抗甲狀腺微粒體抗體，抗雙鏈DNA抗體，免疫球蛋白IgG，IgA，IgM，IgE，補體C3

2、，C4含量及抗透明帶抗體濃度，并進行統(tǒng)計學分析。 第二部分實驗性自身免疫性卵巢早衰小鼠模型的建立：取近交系雌性小鼠（C57BL/6J），鼠齡7-9周130只，分別為模型組120只、空白對照組10只，各組小鼠均于雙后腳掌掌心處進行皮下注射。模型組注射CFA-pZP3混合液0.1毫升，其中包含CFA：0.05毫升，pZP3：72.225ug；空白對照組注射三蒸水0.1毫升。建模觀察指標為④各組小鼠陰道脫落細胞涂片觀察性周期的改變；②

3、采用ELISA檢測小鼠外周血清中抗透明帶抗體的濃度；③光學顯微鏡檢查各組小鼠卵巢組織學改變：以生長卵泡所占比例表示卵巢萎縮受損程度；④免疫組化法檢測卵巢組織中CD45陽性細胞的浸潤程度判斷其自身免疫性卵巢炎嚴重程度。模型組隨機選擇10只小鼠與空白組進行統(tǒng)計學比較和分析，評估建模是否成功。 第三部分糖皮質激素和雄激素治療實驗性自身免疫性卵巢早衰小鼠的研究：以出現明顯性周期紊亂為標準，選擇建模成功的自身免疫性POF小鼠80只，隨機分

4、為4組：每組20只，模型對照組同期每日腹腔注射三蒸水0.05ml，其余三組分別給以糖皮質激素、雄激素、糖皮質激素加雄激素聯合治療三個性周期，以上述建模指標進行檢測作為療效觀察指標，判斷其治療效果，并進行統(tǒng)計學分析。 結果： 第一部分：研究組ANA，AOAb，ds-DNA，A-TG陽性率及抗透明帶抗體濃度分別為38.5％，40.4％，35.5％，44.2％和110.42±10.38pg/ml，均顯著性高于對照組，P<0.0

5、5；研究組ACA、免疫球蛋白IgM、補體C3異常率較高，分別28.8％、23.1％和25％，但與對照組無顯著性差別，P>0.05；研究組免疫球蛋白IgG，IgA，IgE，補體C4異常率較低分別為5.8％，1.9％，1.9％，3.8％，與對照組無顯著性差別，P>0.05。 第二部分：模型組小鼠80％表現為性周期紊亂，血清抗透明帶抗體平均濃度高達17.55±3.52（ng/ml），生長卵泡比例低達22.44±5.88（％），出現自身

6、免疫性卵巢炎，即CD45陽性細胞浸潤的小鼠比例為90％，上述指標均較空白組有顯著性差異，P<0.01。 第三部分：①性周期正常者糖皮質激素組60％，雄激素組70％，聯合治療組65％，模型對照組僅10％。各治療組與模型對照組均存在顯著差異，P<0.01。但三個治療組進行兩組間比較，均無顯著差異，P>0.05。②皮質激素組、雄激素組及聯合治療組小鼠血清抗透明帶抗體平均濃度分別為（ng/ml）21.18±6.72，16.12±4.64

7、和18.32±5.28，與模型對照組（32.61±8.77）比較均存在顯著差異，P<0.01。糖皮質激素組明顯高于與雄激素組，P<0.01。糖皮質激素組與聯合治療組、雄激素組與聯合治療組之間均不存在顯著差異，P>0.05。③糖皮質激素組、雄激素組及聯合治療組各組小鼠組織學檢查生長卵泡比例分別為（％）36.8±8.00，37.5±6.06和30.71±4.36，與模型對照組（25.72±5.31）比較均存在顯著差異，P<0.01。糖皮質激

8、素組與雄激素組無顯著差異，P>0.05；糖皮質激素組與聯合組、雄激素組與聯合治療組之間均存在顯著差異，P<0.01。④各組出現自身免疫性卵巢炎，即CD45陽性細胞浸潤的小鼠比例分別為糖皮質激素組25％，雄激素組30％，聯合治療組50％，均與模型對照組90％存在顯著差異，P<0.01。三個治療組進行兩組間比較，均無顯著差異，P>0.05。 結論： 1.卵巢早衰患者存在多種自身免疫性抗體，ANA，AOAb，ds-DNA，A-

9、TG，抗透明帶抗體等檢測對診斷自身免疫性卵巢早衰有臨床實際意義。 2.通過給小鼠皮下免疫注射小鼠透明帶多肽片段，成功地建立了小鼠的自身免疫性卵巢早衰的實驗動物模型，為進行卵巢早衰的診斷學及治療學方面的研究提供了前提條件。 3.糖皮質激素和雄激素均能顯著改善實驗性自身免疫性卵巢早衰小鼠的臨床癥狀及免疫反應指標。且二者療效無顯著性差異。 4.糖皮質激素和雄激素聯合治療實驗性自身免疫性卵巢早衰小鼠的效果并不優(yōu)于上述兩者