自身免疫性心肌炎中Th17-Treg細胞的變化與意義.pdf

1、目的:
　　研究實驗性自身免疫性心肌炎(EAM)疾病過程中Th17細胞與Treg細胞特異性轉錄因子RORγt和Foxp3及其相關細胞因子IL-17和TGF-β的動態(tài)變化,探討Th17細胞與Treg細胞及其細胞因子在EAM進展中的作用及意義。
　　方法:
　　采用豬心肌肌球蛋白和完全弗氏佐劑混合乳化液皮下注射Balb/C小鼠方法誘導制備EAM動物模型,正常對照組以PBS代替豬心肌肌球蛋白皮下注射。并按下述方式分組,每組6

2、只。各組于相應時間點眼球采血處死,留取心臟標本,HE染色觀察心肌組織病理變化,RT-PCR檢測心肌RORγt、Foxp3、IL-17和TGF-βmRNA轉錄水平,免疫組化檢測小鼠心肌組織IL-17和Foxp3蛋白水平,ELISA方法檢測血清IL-17和TGF-β蛋白表達。分組方式一:先將EAM組和正常對照組隨機分成7d、21d、56d3個不同時間段亞組;分組方式二:另將EAM組小鼠隨機分為IL-17單克隆抗體干預組(IL-17mAb組)

3、、同型對照組和PBS組,于免疫后第0、1、2d分別尾靜脈注射100ug/0.1ml的IL-17mAb、同型對照抗小鼠IgG2A或0.1mlPBS。
　　結果:
　　1.心肌組織病理改變EAM組小鼠7d時心肌細胞腫脹,21d可見心外膜下及心肌間質出現(xiàn)廣泛炎癥細胞浸潤,肌纖維排列紊亂,伴有心肌壞死區(qū),56d炎癥細胞浸潤明顯減少,出現(xiàn)較多纖維增生。與正常對照組相比,EAM組各時間點炎癥積分均升高(P<0.05)。IL-17mAb組

4、心肌浸潤細胞明顯減少,心肌病理積分與同型對照組和PBS組相比顯著減低(P<0.01),但仍高于正常對照組。同型對照組和PBS組之間比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05),均明顯高于正常對照組(P<0.01)。
　　2.心肌組織IL-17、Foxp3蛋白表達免疫組織化學結果顯示EAM組心肌組織7d有少量IL-17、Foxp3蛋白表達,21d時表達量達到高峰,56d表達下降,高于正常對照組小鼠心肌組織表達量(P<0.01)。正常對照組各時間

5、點比較無明顯差異(P>0.05)。IL-17mAb組IL-17和Foxp3蛋白水平明顯降低,低于同型對照組和PBS組,高于正常對照組,均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。同型對照組、PBS組IL-17和Foxp3蛋白表達較對照組明顯增加,兩組之間比較無差異(P>0.05)。
　　3.心肌組織RORγt、Foxp3、IL-17和TGF-βmRNA表達EAM組21d心肌RORγt、Foxp3、IL-17和TGF-βmRNA表達較正常對照組

6、明顯升高(P<0.05),7d和56d變化無統(tǒng)計學意義(P>0.05),21d時各指標mRNA升高最為顯著。RORγt、Foxp3、IL-17和TGF-βmRNA轉錄水平IL-17mAb組、同型對照組和PBS組均比對照組表達升高(P<0.01),IL-17mAb組與同型對照組和PBS組相比沒有差異(P>0.05)。
　　4.血清IL-17和TGF-β水平EAM組21d和56d小鼠血清IL-17和TGF-β蛋白表達水平較正常對照組升

7、高(P<0.05),21dIL-17和TGF-β蛋白表達要顯著高于7d和56d表達量(P<0.01)。正常對照組各時間點比較無明顯差異(P>0.05)。IL-17mAb組血清IL-17、TGF-β含量明顯比同型對照組和PBS組低,與正常對照組相比處于較高水平。同型對照組和PBS組IL-17含量顯著高于正常對照組,兩組比較沒有差異(P>0.05)。
　　結論:
　　1、注射豬心肌肌球蛋白可成功誘導出小鼠實驗性自身免疫性心肌炎。