實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠模型的構建及其免疫學機制的探討.pdf

1、目的:多發(fā)性硬化(multiple sclerosis，MS)是中樞神經系統(tǒng)炎性脫髓鞘性疾病，具有復發(fā)、遷延、致殘率高等特點。由于MS標本不易獲取，限制了對該疾病的研究，因此建立相應的動物模型是研究MS病理過程、發(fā)病機制的重要途徑。本實驗用髓鞘少突膠質細胞糖蛋白<,35-55>(myelinoligodendrocyte glycoprotein <,35-55>，MOG<,35-55>)多肽誘導C57BL/6小鼠，嘗試建立穩(wěn)定、可靠、

2、發(fā)病率高的．MS的動物模型一實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)，并初步探討其發(fā)病的免疫學機制，為進一步開展對MS發(fā)病機制和防治方法的研究奠定基礎。 方法: 1．用含300μg或150μgMOG<,35-55>抗原的乳化產物皮下免疫C57BL/6小鼠， 6天后進行二次免疫，同時在第一次免疫后立即和2天后腹腔注射0.1 ml百日咳桿菌菌液，誘

3、導C57BL/6小鼠的EAE模型。通過對小鼠體重，癥狀及中樞神經系統(tǒng)病理改變的觀察，評估EAE模型的建立情況。 2．應用MTT法檢測小鼠脾臟T淋巴細胞活化增殖程度；應用間接ELISA技術測定小鼠血清中抗MOG<,35-55>抗體水平；應用雙抗體夾心法檢測小鼠血清中IFN-γ的濃度。通過比較EAE小鼠和正常小鼠T淋巴細胞的增殖、血清抗MOG<,35-55>抗體和IFN-γ變化情況的不同，初步探討EAE發(fā)病的免疫學機制。 結

4、果: 1． 150μgMOG<,35-55>劑量組小鼠發(fā)病率為80％，最高臨床評分為3分；300μg MOG<,35-55>劑量組發(fā)病率為100％，最高臨床評分可達5分，且腦脊髓組織切片顯示炎性細胞浸潤和白質脫髓鞘等病理改變，300μg MOG<,35-55>劑量組中樞神經系統(tǒng)病理改變較明顯。 2．用不同濃度的MOG<,35-55>蛋白刺激EAE小鼠脾臟T淋巴細胞發(fā)現(xiàn)，在0.5～5.0μg/ml的范圍內，刺激指數(shù)隨濃度增

5、加而增大，即T細胞增殖隨濃度增加而增強；在15.0～50.0μg/ml范圍內，隨濃度的增加，T細胞增殖無明顯變化。 3．不同發(fā)病狀態(tài)檢測血清抗體發(fā)現(xiàn)，在發(fā)病初(ip 2w)抗體陽性，在發(fā)病高峰(ip 3w)抗體異常升高，隨著病情緩解抗體又逐漸下降。血清抗體與疾病的發(fā)生發(fā)展有一定的關系。 4．檢測不同發(fā)病狀態(tài)的小鼠血清中的IFN-γ水平，發(fā)現(xiàn)隨評分的增加血清中IFN-γ的水平升高。 結論: 1．我們將MOG

6、<,35-55>與CFA充分乳化后，皮下免疫C57BL/6小鼠，外加腹腔注射百日咳菌液，成功的構建了C57BL/6慢性單時相EAE模型，該模型不僅發(fā)病率高、穩(wěn)定可靠，而且病理改變接近MS，是研究MS的理想動物模型。 2．通過比較EAE小鼠和正常小鼠T淋巴細胞的增殖、血清抗MOG<,35-55>抗體和IFN-γ水平的不同，顯示T細胞的活化、抗體的升高、細胞因子的異?？赡芄餐瑢е铝薊AE的發(fā)生。為以后進一步開展對MS發(fā)病機制和治療的