實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠模型的構(gòu)建及其免疫學(xué)機(jī)制的探討.pdf

1、目的:多發(fā)性硬化(multiple sclerosis，MS)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘性疾病，具有復(fù)發(fā)、遷延、致殘率高等特點(diǎn)。由于MS標(biāo)本不易獲取，限制了對(duì)該疾病的研究，因此建立相應(yīng)的動(dòng)物模型是研究MS病理過(guò)程、發(fā)病機(jī)制的重要途徑。本實(shí)驗(yàn)用髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白<,35-55>(myelinoligodendrocyte glycoprotein <,35-55>，MOG<,35-55>)多肽誘導(dǎo)C57BL/6小鼠，嘗試建立穩(wěn)定、可靠、

2、發(fā)病率高的．MS的動(dòng)物模型一實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)，并初步探討其發(fā)病的免疫學(xué)機(jī)制，為進(jìn)一步開(kāi)展對(duì)MS發(fā)病機(jī)制和防治方法的研究奠定基礎(chǔ)。 方法: 1．用含300μg或150μgMOG<,35-55>抗原的乳化產(chǎn)物皮下免疫C57BL/6小鼠， 6天后進(jìn)行二次免疫，同時(shí)在第一次免疫后立即和2天后腹腔注射0.1 ml百日咳桿菌菌液，誘

3、導(dǎo)C57BL/6小鼠的EAE模型。通過(guò)對(duì)小鼠體重，癥狀及中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理改變的觀察，評(píng)估EAE模型的建立情況。 2．應(yīng)用MTT法檢測(cè)小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞活化增殖程度；應(yīng)用間接ELISA技術(shù)測(cè)定小鼠血清中抗MOG<,35-55>抗體水平；應(yīng)用雙抗體夾心法檢測(cè)小鼠血清中IFN-γ的濃度。通過(guò)比較EAE小鼠和正常小鼠T淋巴細(xì)胞的增殖、血清抗MOG<,35-55>抗體和IFN-γ變化情況的不同，初步探討EAE發(fā)病的免疫學(xué)機(jī)制。 結(jié)

4、果: 1． 150μgMOG<,35-55>劑量組小鼠發(fā)病率為80％，最高臨床評(píng)分為3分；300μg MOG<,35-55>劑量組發(fā)病率為100％，最高臨床評(píng)分可達(dá)5分，且腦脊髓組織切片顯示炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和白質(zhì)脫髓鞘等病理改變，300μg MOG<,35-55>劑量組中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理改變較明顯。 2．用不同濃度的MOG<,35-55>蛋白刺激EAE小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，在0.5～5.0μg/ml的范圍內(nèi)，刺激指數(shù)隨濃度增

5、加而增大，即T細(xì)胞增殖隨濃度增加而增強(qiáng)；在15.0～50.0μg/ml范圍內(nèi)，隨濃度的增加，T細(xì)胞增殖無(wú)明顯變化。 3．不同發(fā)病狀態(tài)檢測(cè)血清抗體發(fā)現(xiàn)，在發(fā)病初(ip 2w)抗體陽(yáng)性，在發(fā)病高峰(ip 3w)抗體異常升高，隨著病情緩解抗體又逐漸下降。血清抗體與疾病的發(fā)生發(fā)展有一定的關(guān)系。 4．檢測(cè)不同發(fā)病狀態(tài)的小鼠血清中的IFN-γ水平，發(fā)現(xiàn)隨評(píng)分的增加血清中IFN-γ的水平升高。 結(jié)論: 1．我們將MOG

6、<,35-55>與CFA充分乳化后，皮下免疫C57BL/6小鼠，外加腹腔注射百日咳菌液，成功的構(gòu)建了C57BL/6慢性單時(shí)相EAE模型，該模型不僅發(fā)病率高、穩(wěn)定可靠，而且病理改變接近MS，是研究MS的理想動(dòng)物模型。 2．通過(guò)比較EAE小鼠和正常小鼠T淋巴細(xì)胞的增殖、血清抗MOG<,35-55>抗體和IFN-γ水平的不同，顯示T細(xì)胞的活化、抗體的升高、細(xì)胞因子的異?？赡芄餐瑢?dǎo)致了EAE的發(fā)生。為以后進(jìn)一步開(kāi)展對(duì)MS發(fā)病機(jī)制和治療的