黃芩苷對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的保護(hù)作用及其機(jī)制探討.pdf

1、急性播散性腦脊髓炎、多發(fā)性硬化是較常見的中樞神經(jīng)脫髓鞘疾病，目前認(rèn)為它們是CD4+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的以炎性脫髓鞘為特征的一類自身免疫性疾病。實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)是研究該病的理想動(dòng)物模型。在疾病恢復(fù)過程中，淋巴細(xì)胞以凋亡的方式被清除，從而終止了對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的免疫攻擊。糖皮質(zhì)激素被公認(rèn)為對(duì)EAE有治療作用，其治療與促進(jìn)T細(xì)胞凋亡有關(guān)。但這類藥有抑制正常免疫、水鈉潴留等副作用，一定程度上限制了其臨床使用。以前的實(shí)驗(yàn)已證實(shí)黃芩苷可通過

2、抑制NF-kB的活性，減少細(xì)胞因子的產(chǎn)生而對(duì)感染性腦水腫起保護(hù)作用。那么，黃芩苷對(duì)EAE有否保護(hù)作用呢?目前國內(nèi)外鮮見報(bào)道。如果實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蜃C實(shí)黃芩苷對(duì)EAE有保護(hù)作用，則可望成為一種理想的治療EAE的新藥。 一.大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎模型制備 目的：建立大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)模型，并討論模型制作中的有關(guān)問題。 方法：健康6～8周齡Wistar大鼠30只隨機(jī)分為①空白對(duì)照組(CON，n=8)；②

3、完全福氏佐劑組(CFA，n=10)；③EAE組(n=12)，采用四足墊皮內(nèi)注射豚鼠全脊髓勻漿(GPSPH)和自制完全福氏佐劑(CFA，含滅活卡介苗6 mg／mL)混合乳劑，誘導(dǎo)Wistar大鼠EAE模型。動(dòng)物免疫抗原后，每天予以神經(jīng)功能評(píng)分，稱體重，觀察發(fā)病日期。免疫后14 d處死動(dòng)物，取大鼠腦干、脊髓(腰膨大處)組織，常規(guī)病理切片、HE染色、免疫組織化學(xué)法檢測(cè)白質(zhì)髓鞘堿性蛋白(MBP)抗原。 結(jié)論：本方法制作Wistar大鼠：

4、EAE模型成功，該模型價(jià)格相對(duì)低廉、成功率高、易于制作，可重復(fù)性強(qiáng)。 二. 黃芩苷對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的保護(hù)作用及其機(jī)制探討 目的：觀察黃芩苷對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的保護(hù)作用和黃芩苷對(duì)EAE大鼠CNS浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞凋亡的影響來探討其保護(hù)作用的可能機(jī)制。 方法：健康6～8周Wistar大鼠42只隨機(jī)分為4組：①空白對(duì)照組(CON，n=8)；②實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎組(EAE，n=12)；③地塞米

5、松治療組(DXM：n=l2)；④黃芩苷治療組(BAC，n=lO)。DXM組在抗原免疫后1周予以地塞米松2mg／(kg．d)×7d，腹腔注射；BAC組在抗原免疫后1周予以黃芩苷溶液200mg／(kg．d)×7d，腹腔注射；EAE組和CON組每日以同體積的生理鹽水腹腔注射。分別觀察各組動(dòng)物臨床發(fā)病率、前后體重比、神經(jīng)功能評(píng)分等，大鼠免疫14d后處死，取脊髓(腰膨大處)行石蠟包埋、病理切片，比較各組：HE染色的病灶數(shù)，免疫組織化學(xué)檢測(cè)MBP，