二甲雙胍對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的保護(hù)作用及作用機(jī)制探討.pdf

1、多發(fā)性硬化(multiple sclerosis, MS)是以炎細(xì)胞浸潤、髓鞘脫失和繼發(fā)軸索損傷為主要特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nerves system, CNS)自身免疫性脫髓鞘疾病。MS的病因復(fù)雜，涉及環(huán)境、遺傳易感性等諸多因素。盡管其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，但越來越多的證據(jù)表明，抗原特異性Th17細(xì)胞介導(dǎo)的異常免疫反應(yīng)和執(zhí)行免疫耐受的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)的功能異常在MS的發(fā)病機(jī)制中起到重要作用。
　　Th17細(xì)

2、胞在外周免疫器官的生成及其向CNS的浸潤，在MS和實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)的發(fā)病機(jī)制中都起到重要的作用。Th17細(xì)胞及其特征性細(xì)胞因子interleukin(IL)-17通過多種機(jī)制參與MS病理損傷過程，IL-17可以通過與血腦屏障(blood–brain barrier, BBB)中內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的IL-17R結(jié)合，減少緊密結(jié)合蛋白表達(dá)而破壞

3、 BBB，促進(jìn)炎細(xì)胞向中樞神經(jīng)系統(tǒng)浸潤，誘導(dǎo)促炎因子生成等多種途徑進(jìn)一步加重免疫反應(yīng)。而 Treg細(xì)胞可以通過細(xì)胞接觸依賴的途徑來達(dá)到對(duì)自身反應(yīng)效應(yīng)T細(xì)胞活化和增殖的控制。
　　外界抗原等刺激可以使淋巴細(xì)胞向不同的細(xì)胞功能亞群分化，不同功能的T細(xì)胞亞群需要不同的能量和生物合成途徑來維持其特殊功能需要。隨著不斷的研究，細(xì)胞代謝已經(jīng)被認(rèn)為是 T細(xì)胞特殊功能的重要調(diào)節(jié)因素，在激活的效應(yīng) T細(xì)胞中為滿足生物合成的需要和產(chǎn)生足夠的能量，細(xì)胞

4、代謝方式從以氧化磷酸化為主向有氧糖酵解為主轉(zhuǎn)換。相反，在靜止T細(xì)胞和Treg細(xì)胞中，氧化磷酸化卻作為主要能量供應(yīng)代謝方式。
　　哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶(Mammalian target of rapamycin, mTOR)是一種進(jìn)化保守的絲氨酸蘇氨酸激酶，除了在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、增殖、存活、代謝等方面起作用外，在輔助 T細(xì)胞的活化和分化過程中也具有至關(guān)重要的作用。mTOR及其下游低氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducer fac

5、tor-1α, HIF-1α)參與的糖酵解代謝在Th17細(xì)胞的分化發(fā)展過程中起到重要作用。HIF-1α還調(diào)節(jié)多種參與糖酵解代謝的基因，包括葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(glucose transport protein1, Glut1)、丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase M2, PKM2)，而這些基因編碼了參與調(diào)節(jié)糖酵解代謝的酶，并在效應(yīng) T細(xì)胞的分化及功能決定過程中起作用。
　　腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated

6、protein kinase, AMPK)是受多種代謝刺激調(diào)控的高度保守的細(xì)胞能量感受器，AMPK和mTOR在調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝和免疫的信號(hào)連接途徑中起到相反的作用，AMPK可以通過磷酸化結(jié)節(jié)性硬化復(fù)合體2(Tuberous sclerosis complex2, TSC2)、mTORC1的結(jié)構(gòu)蛋白raptor來抑制mTOR的功能。AMPK可以通過抑制mTOR介導(dǎo)的糖酵解代謝和調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝進(jìn)而影響Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞的產(chǎn)生。
　　

7、二甲雙胍(metformin, MET)是廣泛應(yīng)用于2型糖尿病的一線臨床用藥。它的藥理作用和 AMPK的激活有關(guān)。二甲雙胍除了降糖作用外，在抗炎、抗氧化、輔助巨噬細(xì)胞向不同類型轉(zhuǎn)換等方面的作用逐漸被人們關(guān)注，并已有用于治療除糖尿病外的多種疾病的實(shí)驗(yàn)研究?；?mTOR及AMPK的相互作用及其通路對(duì)于效應(yīng)T細(xì)胞的可能作用，我們考慮MET可能對(duì)EAE具有保護(hù)作用，且這種保護(hù)作用是通過對(duì)于T細(xì)胞的調(diào)節(jié)達(dá)到的。在我們的研究中，我們利用MOG35

8、-55免疫C57BL/6小鼠制備EAE模型，觀察給予MET干預(yù)是否對(duì)于EAE具有保護(hù)作用，以及它對(duì) EAE模型中 Th17細(xì)胞和 Treg細(xì)胞反應(yīng)的影響，并對(duì) MET是否通過調(diào)節(jié)mTOR/HIF-1α通路來進(jìn)一步調(diào)節(jié)Th17/Treg細(xì)胞平衡進(jìn)行研究。
　　第一部分二甲雙胍通過調(diào)節(jié)Th17/Treg細(xì)胞平衡改善實(shí)驗(yàn)性自身免疫腦脊髓炎病情
　　目的:建立C57BL/6小鼠EAE模型，應(yīng)用二甲雙胍干預(yù)，觀察用藥干預(yù)組和EAE模型

9、組發(fā)病情況及脊髓中炎性細(xì)胞浸潤情況，觀察兩組中Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞數(shù)量變化及相應(yīng)的特征性炎癥因子、轉(zhuǎn)錄因子的變化。
　　方法：
　　1采用近交系雌性C57BL/6小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，周齡8-10周，體重為18-20g。應(yīng)用 MOG35-55作為抗原，與完全弗氏佐劑和結(jié)核菌素混合后給予小鼠背部皮下注射，并于免疫當(dāng)天（即第0h）及第2天（即48h）分兩次腹腔注射0.5ml百日咳毒素(PTX)，建立EAE動(dòng)物模型。
　　

10、2將雌性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、EAE模型組和MET治療組。自免疫后第1天（免疫當(dāng)日記作第0天）開始，MET治療組小鼠給予每日腹腔注射MET100mg/kg，正常對(duì)照組及EAE模型組小鼠每日腹腔注射等量的生理鹽水。自免疫日開始，每日給予小鼠兩次神經(jīng)功能評(píng)分，并測(cè)量體重，連續(xù)觀察30天，神經(jīng)功能評(píng)分采用Knoz評(píng)分法。
　　3應(yīng)用HE染色對(duì)小鼠脊髓切片進(jìn)行染色，觀察脊髓組織中炎性細(xì)胞浸潤程度。
　　4應(yīng)用流式細(xì)胞

11、檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)各組小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)懸液中Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞的比例。
　　5應(yīng)用ELISA檢測(cè)方法檢測(cè)脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中的炎癥因子IL-17A、IL-10、TGF-β含量。
　　6應(yīng)用 qPCR方法檢測(cè)小鼠脾組織及脊髓組織中炎癥因子 IL-17A、IL-10、TGF-β mRNA轉(zhuǎn)錄水平和Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt、Foxp3mRNA轉(zhuǎn)錄水平。
　　7采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)

12、驗(yàn)數(shù)據(jù)以"均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差"((-x)±s)表示。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)。發(fā)病率用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以百分比表示。臨床神經(jīng)功能評(píng)分用Mann–Whitney U檢驗(yàn)。多組計(jì)量資料均數(shù)的比較：方差齊時(shí)應(yīng)用ONE-WAY-ANOVA中SNK-q檢驗(yàn)進(jìn)行方差分析，方差不齊時(shí)應(yīng)用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1 MET對(duì)于EAE發(fā)病率及臨床評(píng)分的影：MET降低了EAE的發(fā)病率（P<0.05）

13、并改善了EAE發(fā)病的臨床癥狀（P<0.01）。2 MET減少EAE中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性細(xì)胞浸潤：發(fā)病高峰期EAE模型組小鼠脊髓組織炎癥評(píng)分較 MET治療組比較明顯增加（P<0.01）。3 MET減輕 EAE中Th17細(xì)胞反應(yīng)：流式細(xì)胞檢測(cè)Th17細(xì)胞含量顯示MET治療組Th17細(xì)胞比例較EAE模型組下降（P<0.01）。ELISA檢測(cè)脾細(xì)胞上清培養(yǎng)液中IL-17A含量顯示MET治療組細(xì)胞因子IL-17A含量低于EAE模型組（P<0.01）。

14、qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示脾組織中 Th17細(xì)胞的特征性轉(zhuǎn)錄因子RORγt mRNA轉(zhuǎn)錄水平在MET治療組下降（P<0.01）。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，IL-17A和RORγt mRNA轉(zhuǎn)錄水平在MET治療組中下降（P<0.01）。4 MET促進(jìn)了EAE中Treg細(xì)胞反應(yīng)：流式細(xì)胞檢測(cè)Treg細(xì)胞含量顯示MET治療組Treg細(xì)胞比例較EAE模型組提高（P<0.01）。ELISA檢測(cè)脾細(xì)胞上清培養(yǎng)液中 IL-10、TGF-β顯示 MET治療組細(xì)胞因子

15、含量高于EAE模型組（P<0.01）。qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示脾組織中IL-10、TGF-β和Foxp3 mRNA轉(zhuǎn)錄水平在MET治療組中提高（P<0.01）。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中， IL-10、TGF-β和 Foxp3 mRNA轉(zhuǎn)錄水平在 MET治療組中提高（P<0.01）。
　　第二部分 AMPK/mTOR信號(hào)通路中涉及代謝的分子在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎疾病中的動(dòng)態(tài)變化
　　目的:建立C57BL/6小鼠EAE模型，按照疾病模型

16、發(fā)病規(guī)律將病程分為發(fā)病初期、發(fā)病高峰期、疾病緩解期，在發(fā)病各個(gè)時(shí)期檢測(cè) AMPK及mTOR/HIF-1α通路參與細(xì)胞代謝的HIF-1α、Glut1、PKM2的表達(dá)情況。
　　方法：
　　1采用近交系雌性C57BL/6小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，周齡8-10周，體重為18-20g。應(yīng)用 MOG35-55作為抗原，與完全弗氏佐劑和結(jié)核菌素混合后給予小鼠背部皮下注射，并于免疫當(dāng)天（即第0h）及第2天（即48h）分兩次腹腔注射0.5ml百日咳

17、毒素(PTX)，建立EAE動(dòng)物模型。自免疫日開始，每日給予小鼠兩次神經(jīng)功能評(píng)分，并測(cè)量體重連續(xù)觀察30天，神經(jīng)功能評(píng)分采用Knoz評(píng)分法。
　　2根據(jù)疾病病程在發(fā)病初期（免疫后13d）、發(fā)病高峰期（免疫后20d）、疾病緩解期（免疫后30d）分別對(duì)EAE小鼠脾組織進(jìn)行取材，應(yīng)用Western blot方法檢測(cè)脾組織中AMPK、qAMPK、HIF-1α蛋白表達(dá)，應(yīng)用 qPCR檢測(cè)方法檢測(cè)脾組織中HIF-1α、Glut1、PKM2及Th

18、17細(xì)胞特征性細(xì)胞因子IL-17，特征性轉(zhuǎn)錄因子RORγt，Treg細(xì)胞特征性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3 mRNA轉(zhuǎn)錄水平。
　　3采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以"均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差"((-x)±s)表示。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)。多組計(jì)量資料均數(shù)的比較：方差齊時(shí)應(yīng)用ONE-WAY-ANOVA中SNK-q檢驗(yàn)進(jìn)行方差分析，方差不齊時(shí)應(yīng)用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1 EA

19、E發(fā)病情況：EAE組小鼠的發(fā)病率為100％,平均發(fā)病時(shí)間為12.40±1.83天，平均達(dá)峰時(shí)間為19.0±1.25天。高峰期神經(jīng)功能評(píng)分2.85±0.24分。2 HIF-1α在疾病發(fā)病過程中的變化：Western blot結(jié)果顯示發(fā)病初期較正常對(duì)照組無明顯變化；發(fā)病高峰期HIF-1α表達(dá)較正常對(duì)照組明顯增高（P<0.01）。發(fā)病高峰期HIF-1α表達(dá)較發(fā)病初期增高(P<0.05)。發(fā)病高峰期HIF-1α表達(dá)較發(fā)病緩解期增高。發(fā)病緩解期較

20、正常對(duì)照組無明顯變化。qPCR結(jié)果顯示發(fā)病高峰期HIF-1αmRNA轉(zhuǎn)錄較正常對(duì)照升高(P<0.01)。發(fā)病高峰期HIF-1α mRNA轉(zhuǎn)錄較發(fā)病初期增高。發(fā)病高峰期與發(fā)病緩解期相比，HIF-1α mRNA轉(zhuǎn)錄增高。發(fā)病緩解期較正常對(duì)照組HIF-1αmRNA轉(zhuǎn)錄增高(P<0.05)。3 Glut1在疾病發(fā)病過程中的變化：PCR結(jié)果顯示發(fā)病初期、發(fā)病高峰期、發(fā)病緩解期較正常對(duì)照組Glut1 mRNA轉(zhuǎn)錄水平增高(發(fā)病初期、發(fā)病高峰期P<0

21、.01，發(fā)病緩解期P<0.05)。發(fā)病高峰期與發(fā)病初期相比，Glut1 mRNA轉(zhuǎn)錄增高(P<0.01)。發(fā)病高峰期與發(fā)病緩解期相比，Glut1 mRNA轉(zhuǎn)錄增高(P<0.01)。發(fā)病初期較發(fā)病緩解期Glut1 mRNA轉(zhuǎn)錄增高(P<0.05)。4 PKM2在疾病發(fā)病過程中的變化：qPCR結(jié)果顯示發(fā)病高峰期PKM2 mRNA轉(zhuǎn)錄較正常對(duì)照、發(fā)病初期、緩解期相比升高(P<0.01)。發(fā)病初期、緩解期較正常對(duì)照組相比無明顯變化。5 RORγ

22、t在疾病發(fā)病過程中的變化：qPCR結(jié)果顯示發(fā)病初期、發(fā)病高峰期、發(fā)病緩解期較正常對(duì)照組RORγt mRNA轉(zhuǎn)錄水平增高(P<0.01)。發(fā)病高峰期較發(fā)病初期，緩解期相比， RORγt mRNA轉(zhuǎn)錄水平增高(P<0.01)。緩解期較發(fā)病初期比，RORγt mRNA轉(zhuǎn)錄水平增高(P<0.05)。6 IL-17在疾病發(fā)病過程中的變化：qPCR結(jié)果顯示發(fā)病高峰期、發(fā)病緩解期較正常對(duì)照組IL-17 mRNA轉(zhuǎn)錄增高(P<0.01)。發(fā)病高峰期、發(fā)

23、病緩解期較發(fā)病初期相比，IL-17 mRNA轉(zhuǎn)錄增高(P<0.01)。高峰期較緩解期比， IL-17 mRNA轉(zhuǎn)錄增高(P<0.01)。7 AMPKα在疾病發(fā)病過程中活化程度的變化：Western blot結(jié)果顯示發(fā)病初期、發(fā)病高峰期較正常對(duì)照組無明顯變化；發(fā)病高峰期較發(fā)病初期AMPKα蛋白磷酸化程度增高(P<0.05)。發(fā)病緩解期較正常對(duì)照組、發(fā)病初期、發(fā)病高峰期相比，AMPKα蛋白磷酸化程度明顯增高(P<0.01)。8 Foxp3在

24、疾病發(fā)病過程中的變化：qPCR結(jié)果顯示發(fā)病初期、高峰期較正常對(duì)照組Foxp3mRNA轉(zhuǎn)錄無明顯變化。發(fā)病緩解期較發(fā)病初期、發(fā)病高峰期相比， Foxp3 mRNA轉(zhuǎn)錄增高(P<0.01)。發(fā)病緩解期較正常對(duì)照組相比，F(xiàn)oxp3 mRNA轉(zhuǎn)錄無明顯變化。
　　第三部分二甲雙胍通過激活A(yù)MPK抑制mTOR/HIF-1α通路發(fā)揮對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的保護(hù)作用
　　目的:建立C57BL/6小鼠EAE模型，給予二甲雙胍干預(yù)，觀察E

25、AE模型組和 MET治療組小鼠脾組織中 AMPK激活水平的變化及其對(duì)下游mTOR活性抑制的變化情況。并對(duì) mTOR/HIF-1α通路參與細(xì)胞代謝的HIF-1α、Glut1、PKM2在兩組中的表達(dá)差異進(jìn)行比較。
　　方法：
　　1采用近交系雌性C57BL/6小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，周齡8-10周，體重為18-20g。應(yīng)用 MOG35-55作為抗原，與完全弗氏佐劑和結(jié)核菌素混合后給予小鼠背部皮下注射，并于免疫當(dāng)天（即第0h）及第2天（

26、即48h）分兩次腹腔注射0.5ml百日咳毒素(PTX)，建立EAE動(dòng)物模型。
　　2將雌性 C57BL/6小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、EAE模型組和 MET治療組。自免疫后第1天（免疫當(dāng)日記作第0天）開始，MET治療組小鼠給予每日腹腔注射MET100mg/kg，正常對(duì)照組及EAE模型組小鼠每日腹腔注射等量的生理鹽水。自免疫日開始，每日給予小鼠兩次神經(jīng)功能評(píng)分，并測(cè)量體重，神經(jīng)功能評(píng)分采用Knoz評(píng)分法。
　　3在疾病高峰期對(duì)各組

27、小鼠脾組織取材，應(yīng)用Western blot方法檢測(cè)脾組織中AMPK、pAMPK、S6K1、pS6K1、HIF-1α、IL-17蛋白表達(dá)情況，應(yīng)用qPCR檢測(cè)方法檢測(cè)脾組織中HIF-1α、Glut1、PKM2 mRNA轉(zhuǎn)錄水平。
　　4采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以"均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差"((-x)±s)表示。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)。多組計(jì)量資料均數(shù)的比較：方差齊時(shí)應(yīng)用ONE-WAY-ANOVA中SNK-

28、q檢驗(yàn)進(jìn)行方差分析，方差不齊時(shí)應(yīng)用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1 Western Blot方法檢測(cè)脾組織中pAMPKα/AMPKα：EAE模型組較正常對(duì)照組pAMPKα/AMPKα比較無明顯差異。MET治療組較正常對(duì)照組、EAE模型組pAMPKα/AMPKα表達(dá)增加(P<0.01)。2 Western Blot方法檢測(cè)脾組織中 pS6K1/S6K1：EAE模型組較正常對(duì)照組比較pS6K1/S6K

29、1升高(P<0.01)。MET治療組較EAE模型組比較pS6K1/S6K1減低(P<0.05)。MET治療組較正常對(duì)照組比較pS6K1/S6K1無明顯變化。3 Western Blot、qPCR檢測(cè)脾組織中HIF-1α蛋白表達(dá)水平及mRNA轉(zhuǎn)錄：Western Blot結(jié)果顯示EAE模型組較正常對(duì)照組比較HIF-1α蛋白表達(dá)升高(P<0.01)。MET治療組較 EAE模型組比較 HIF-1α蛋白表達(dá)減低(P<0.01)。MET治療組較正

30、常對(duì)照組比較HIF-1α蛋白表達(dá)無明顯變化。qPCR結(jié)果顯示EAE模型組較正常對(duì)照組比較HIF-1αmRNA轉(zhuǎn)錄水平升高(P<0.01)。MET治療組較EAE模型組比較HIF-1αmRNA轉(zhuǎn)錄水平減低(P<0.01)。MET治療組較正常對(duì)照組比較HIF-1αmRNA轉(zhuǎn)錄水平升高(P<0.01)。4 Western Blot、qPCR方法檢測(cè)脾組織中IL-17蛋白表達(dá)水平及mRNA轉(zhuǎn)錄：Western Blot結(jié)果顯示EAE模型組較正常對(duì)

31、照組比較IL-17蛋白表達(dá)升高(P<0.01)。MET治療組較EAE模型組比較IL-17α蛋白表達(dá)減低(P<0.05)。MET治療組較正常對(duì)照組比較 IL-17蛋白表達(dá)無明顯變化。qPCR結(jié)果顯示EAE模型組較正常對(duì)照組比較IL-17mRNA轉(zhuǎn)錄水平升高(P<0.01)。MET治療組較EAE模型組比較IL-17mRNA轉(zhuǎn)錄水平減低(P<0.01)。MET治療組較正常對(duì)照組比較 IL-17mRNA轉(zhuǎn)錄水平升高(P<0.01)。5 qPCR

32、方法檢測(cè)脾組織中Glut1mRNA轉(zhuǎn)錄：EAE模型組較正常對(duì)照組比較 Glut1mRNA轉(zhuǎn)錄水平升高(P<0.01)。MET治療組較EAE模型組比較Glut1mRNA轉(zhuǎn)錄水平減低(P<0.01)。MET治療組較正常對(duì)照組比較 Glut1轉(zhuǎn)錄水平減低(P<0.05)。6 qPCR方法檢測(cè)脾組織中PKM2 mRNA轉(zhuǎn)錄：EAE模型組較正常對(duì)照組比較PKM2mRNA轉(zhuǎn)錄水平升高(P<0.01)。MET治療組較EAE模型組比較PKM2mRNA轉(zhuǎn)

33、錄水平減低(P<0.01)。MET治療組較正常對(duì)照組比較PKM2mRNA轉(zhuǎn)錄水平減低(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1應(yīng)用MOG35-55免疫C57BL/6雌性小鼠成功建立EAE模型，給予MET干預(yù)可以降低動(dòng)物發(fā)病率并減輕了EAE發(fā)病的臨床癥狀，抑制了炎癥細(xì)胞向中樞神經(jīng)系統(tǒng)的浸潤。
　　2應(yīng)用MET干預(yù)，通過調(diào)節(jié)Th17/Treg細(xì)胞比例，調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞的特征性炎癥因子和轉(zhuǎn)錄因子在外周免疫器官和中樞