p38MAPK抑制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎保護(hù)作用的病理學(xué)研究及機(jī)制探討.pdf

1、目的:多發(fā)性硬化(multiple sclerosis，MS)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)的炎性脫髓鞘性疾病，其發(fā)病機(jī)制尚無定論，近年來研究表明，MS是遺傳、環(huán)境等因素共同作用而發(fā)生的自身免疫過程，其中少突膠質(zhì)細(xì)胞損傷引起的髓鞘脫失是MS的主要病理特點(diǎn)，因此我們可以看出少突膠質(zhì)細(xì)胞在MS的病理過程中起重要作用。p38MAPK是絲裂素蛋白酶激活物(mitogen-activated protein kinase，MAPKs)家族中的一員，它對(duì)細(xì)

2、胞內(nèi)外的多種信號(hào)發(fā)生反應(yīng)，對(duì)細(xì)胞的適應(yīng)、增殖、分化、存活等有重要的調(diào)節(jié)作用，并參與多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理過程。前期的研究表明，抑制p38MAPK可以減輕實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmuneencephalomyelitis，EAE)小鼠神經(jīng)組織的脫髓鞘，但有細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究提出，p38MAPK可以促進(jìn)外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的少突膠質(zhì)細(xì)胞的分化、再生。因此在EAE中，抑制p38MAPK后對(duì)少突膠質(zhì)細(xì)胞系的具

3、體影響如何仍有待進(jìn)一步研究。本課題研究p38MAPK抑制劑對(duì)EAE小鼠脊髓組織髓鞘、少突膠質(zhì)細(xì)胞的影響，探討p38MAPK抑制劑對(duì)EAE模型起保護(hù)作用的機(jī)制，為MS的治療提供新的思路。
　　方法:以MOG35-55為抗原免疫54只C57BL/6小鼠建立EAE模型。小鼠隨機(jī)分為3組，分別為正常對(duì)照組、EAE對(duì)照組、p38MAPK抑制劑干預(yù)組。自EAE免疫當(dāng)天，p38抑制劑組小鼠給予SB2035800.2mg/kg每日腹腔注射;正常對(duì)

4、照組及EAE組小鼠給予等量的生理鹽水每日腹腔注射。觀察小鼠的發(fā)病情況、體重變化及神經(jīng)功能評(píng)分。于免疫后第20天（約相當(dāng)于小鼠發(fā)病高峰期）處死小鼠。取小鼠脊髓腰膨大部位的組織進(jìn)行HE染色觀察炎性細(xì)胞浸潤情況，透射電鏡和LFB髓鞘染色從病理學(xué)和形態(tài)學(xué)觀察髓鞘脫失和軸索損傷情況，并進(jìn)行p38、p-p38、olig2的免疫組織化學(xué)染色對(duì)比陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)觀察p38MAPK抑制劑對(duì)EAE小鼠細(xì)胞中p38及p-p38的影響，并進(jìn)一步探究其是否可以提高o

5、lig2的表達(dá)發(fā)揮促進(jìn)髓鞘再生的作用。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)病率用百分?jǐn)?shù)表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±S）表示，多組計(jì)量資料均數(shù)的比較應(yīng)用ANOVA方差分析，組間兩兩比較采用Dunnett-t檢驗(yàn)，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、各組小鼠臨床表現(xiàn)觀察:正常對(duì)照組小鼠未發(fā)病。發(fā)病高峰期p38MAPK抑制劑組小鼠與EAE組小鼠相比，其發(fā)病率、體重減輕程度及神

6、經(jīng)功能評(píng)分明顯降低(P＜0.05)。
　　2、HE染色:于發(fā)病高峰期EAE組、p38MAPK抑制劑組與正常對(duì)照組比較，小鼠脊髓組織中的炎性細(xì)胞浸潤數(shù)明顯增多(P＜0.05);p38MAPK抑制劑組與EAE組相比較，小鼠脊髓組織炎性細(xì)胞浸潤數(shù)明顯減少(P＜0.05)。
　　3、LFB染色:EAE組發(fā)病高峰期可見大小不等的斑片狀脫髓鞘區(qū)，脊髓白質(zhì)內(nèi)的藍(lán)色髓鞘區(qū)域減少，部分甚至可見空泡樣變性;p38MAPK抑制劑組發(fā)病高峰期可見些

7、許小的髓鞘脫失區(qū)。正常對(duì)照組無脫髓鞘區(qū)。
　　4、透射電鏡:發(fā)病高峰期EAE組小鼠髓鞘的層狀結(jié)構(gòu)排列極為松散，部分髓鞘崩解，斷裂，脫失，軸索萎縮變性，結(jié)構(gòu)不清晰;p38MAPK抑制劑組可見髓鞘排列松散，髓鞘崩解脫失現(xiàn)象及軸索萎縮變性均較少，結(jié)構(gòu)尚清晰。
　　5、p38免疫組織化學(xué):正常對(duì)照組、EAE組及p38MAPK抑制劑組小組脊髓p38免疫陽性細(xì)胞數(shù)無明顯差異(p＞0.05)。
　　6、p-p38免疫組織化學(xué):EAE

8、組與正常對(duì)照組相比，p-p38陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;p38MAPK抑制劑組p-p38陽性細(xì)胞數(shù)較正常對(duì)照組無明顯差異（P＞0.05）;p38MAPK抑制劑組與EAE組相比，陽性細(xì)胞數(shù)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　7、olig2免疫組織化學(xué):發(fā)病高峰期p38MAPK抑制劑組免疫陽性細(xì)胞平均數(shù)目均較EAE組免疫陽性細(xì)胞平均數(shù)目增多，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論: