樹突狀細胞在實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠中的作用研究.pdf

1、目的:建立慢性-非緩解型EAE模型,運用流式、RT-PCR、ELISA等方法從細胞膜表面分子和基因水平檢測樹突狀細胞(DC)成熟度,CD4+CD25+Treg數(shù)量,FoxP3 mRNA及Ror-γt mRNA表達水平、小鼠外周血IL-6及TGF-β分泌水平,以探討樹突狀細胞(DC)在慢性EAE小鼠模型中誘導免疫學相關(guān)機制。
　　方法:54只10-12周近交系健康清潔級雌性C57BL/6小鼠,隨機分為兩組:EAE組(n=30只)和佐

2、劑對照組(n=24只)。各組按病程又分為:發(fā)病初期、高峰期及慢性期。EAE組用乳化好MOG35-55多肽和完全弗氏佐劑(CFA)免疫C57BL/6小鼠,佐劑對照組則用等量的PBS代替MOG35-55,按Ingunn評分標準進行臨床癥狀評分,運用流式細胞術(shù)檢測DC表面CD11c、CD83以及CD4+CD25+Treg數(shù)量;應用RT-PCR方法檢測小鼠淋巴細胞FoxP3 mRNA及Ror-γt mRNA表達水平;應用ELISA方法檢測小鼠外

3、周血中IL-6及TGF-β的分泌水平。
　　結(jié)果:
　　1.小鼠模型EAE組小鼠發(fā)病率達80％(24/30),最高臨床評分可達5分;佐劑對照組則無一發(fā)病,臨床癥狀評分均為0分。
　　2.流式細胞術(shù)檢測EAE組發(fā)病各時期脾細胞懸液中CD11c+CD83+DC細胞數(shù)較佐劑對照組升高(P<0.05);EAE組發(fā)病初期和高峰期脾細胞懸液中CD4+CD25+Treg/淋巴細胞的比例較佐劑對照組降低(P<0.05),慢性期EAE組

4、脾細胞懸液中CD4+CD25+Treg/淋巴細胞的比例則較佐劑對照組升高(P<0.05);佐劑對照組內(nèi)各時期脾細胞懸液中CD4+CD25+Treg/淋巴細胞比例和CD11c+CD83+DC細胞數(shù)相互間比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05),而EAE組內(nèi)各時期相互比較有明顯差異(P<0.05),發(fā)病高峰期CD4+CD25+Treg細胞數(shù)最低,慢性期升高。而CD11c+CD83+DC細胞數(shù)發(fā)病高峰期最高,慢性期降低。
　　3.實時熒光定量R

5、T-PCR結(jié)果顯示EAE組小鼠脾淋巴細胞上FoxP3 mRNA初期及高峰期較對照組表達量減少(P<0.05),而慢性期較佐劑對照組表達增加(P<0.05)。Ror-γt mRNA初期值較對照組表達增加(P<0.05),而高峰期及慢性期較佐劑對照組表達則無顯著差異(P>0.05)。
　　4.ELISA結(jié)果表明EAE組小鼠外周血IL-6、TGF-β含量與佐劑對照組相比較,有顯著性差異(P<0.05)。佐劑對照組小鼠各期之間無差異(P>