3-甲基巴豆酰輔酶A羧化酶缺乏癥的基因突變研究.pdf

1、目的：對臨床疑診3-甲基巴豆酰輔酶A羧化酶缺乏癥（3-Methylcrotonyl-coenzyme A carboxylase deficiency，MCCD）的患者進行MCCC1和MCCC2基因突變分析，從分子生物學(xué)水平證實臨床診斷；了解中國人MCCC1和MCCC2基因突變譜，尋找熱點突變；初步得出新生兒MCCD發(fā)生率；探討基因突變與臨床生化表型的關(guān)系以及血3-羥基異戊酰肉堿（C5-OH）篩查的陽性切割值。
　　方法：2003

2、年至2012年9月經(jīng)新生兒篩查發(fā)現(xiàn)血C5-OH增高并接受隨訪的42例患兒納入本研究。（1）采用常規(guī)PCR基因直接測序法對29例患兒及其父母進行MCCC1和MCCC2基因突變檢測，以明確診斷；（2）對于基因新變異，通過50個正常對照相應(yīng)位點測序、限制性內(nèi)切酶酶切、逆轉(zhuǎn)錄PCR測序及不同物種氨基酸同源性分析等排除多態(tài)性，采用PolyPhen-2、SIFT、UniProt及PDB軟件預(yù)測新變異對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的影響；（3）初步統(tǒng)計新生兒MC

3、CD發(fā)生率；（4）通過門診或電話隨訪了解臨床轉(zhuǎn)歸；（5）通過基因突變結(jié)果分組比較MCCD相關(guān)代謝指標，結(jié)合文獻復(fù)習(xí)以探討基因突變與臨床生化表型的關(guān)系。
　　結(jié)果：（1）29例（28個家系）基因分析發(fā)現(xiàn)16種基因突變，突變檢出率為46.43％（26/56）；其中4例診斷為母源性MCCD，4例良性MCCD，11例MCCD雜合子。16種突變中MCCC1突變13種，均為未報道的新變異，包括7種錯義突變 c.764A>C/p.H255P、c

4、.203C>T/p.A68V、211AG>CC/p.Q74P、c.964G>A/p.E322K、c.572T>C/p.L191P、c.295G>A/p.G99S和c.1331G>A/p.R444H，3種缺失突變c.1124delT、c.39_58del20和c.1518delG，1種插入突變c.ins1680A，2種框移突變c.639+2T>A和c.639+5G>T，其中c.ins1680A突變頻率高達40.91%（9/22）；MCCC

5、2突變3種，包括1種新變異c.1406G>T/p.R469L，2種已報道的錯義突變c.592C>T/p.Q198X和c.518C>T/p.S173L。（2）所有基因新變異均經(jīng)過反向測序、父母基因測序、酶切分析或50個正常對照者基因測序得以證實，排除多態(tài)性可能；8種新錯義變異位點氨基酸在不同物種中均具有高度或中度保守性，經(jīng)軟件預(yù)測可能影響蛋白結(jié)構(gòu)和功能。（3）初步得出新生兒篩查MCCD發(fā)生率至少為1/98340。（4）42例隨訪至最大年齡

6、8.8歲，所有患兒臨床無癥狀，體格智能發(fā)育正常；母源性患兒生化代謝指標逐步下降或達正常，其他患兒血C5-OH仍多偏高。（5）攜帶基因突變的純合子患兒篩查時血C5-OH濃度明顯高于雜合子或未攜帶突變者。
　　結(jié)論：（1）血MS/MS C5-OH增高、尿GC/MS3-MCG增高是診斷MCCD的主要指標；新生兒篩查發(fā)現(xiàn)C5-OH增高者需常規(guī)對其母親篩查以診斷母源性MCCD。（2）臨床高度疑似患兒應(yīng)進行MCCD基因突變分析以明確診斷。（3