用實(shí)時(shí)定量PCR研究人類皰疹病毒5型和6型與口腔扁平苔蘚發(fā)病的關(guān)系.pdf

1、目的與方法：人類皰疹病毒與口腔扁平苔蘚(OLP)的關(guān)系一直沒有定論。由于以前的研究發(fā)現(xiàn)，在活檢組織樣本中HHV-6和HCMV(二者均屬人類皰疹病毒的β亞科)的檢出率比其它皰疹病毒相對(duì)高，再加上OLP在臨床上具有反復(fù)發(fā)作的特點(diǎn)，因此一些研究者猜想，人類皰疹病毒p亞科，特別是HHV-6和HCMV，或許與OLP的發(fā)病有關(guān)系，但缺乏統(tǒng)計(jì)學(xué)的支持。以前的這方面研究主要是采用傳統(tǒng)的定性PCR的方法，雖然定性PCR直到現(xiàn)在仍被用于臨床樣本的檢測(cè)，但它

2、并不能準(zhǔn)確地反映出陽性樣本中病毒的活化和復(fù)制狀況，這是定性PCR的局限性；另外，以前有關(guān)的研究在OLP樣本的選擇方面也存在著某些缺陷。為了進(jìn)一步揭示HHV-6和HCMV與OLP的關(guān)系，本研究在以上兩方面作了改進(jìn)：①我們選用了實(shí)時(shí)定量(teal-time)PCR的檢測(cè)技術(shù)的Cycleave熒光法，其探針是由RNA和DNA雜交而成并在檢測(cè)時(shí)還結(jié)合使用RNase-H，這種檢測(cè)技術(shù)除了在底物擴(kuò)增效率和檢測(cè)準(zhǔn)確性方面優(yōu)于其它的定量：PCR外，還具

3、有高度的靈敏性；②我們有針對(duì)性地選擇可能與病毒有關(guān)的病例，16例OLP患者的取樣范圍包括外周血白細(xì)胞、血漿、唾液、病損區(qū)脫落細(xì)胞、非病損區(qū)脫落細(xì)胞以及活檢組織，并使用了10例健康人作組間對(duì)照，這樣不但可以充分地利用定量PCR技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，而且還使我們的研究更加符合統(tǒng)計(jì)學(xué)的要求。 結(jié)果：在14名(14/16，87.5﹪)OLP患者的27個(gè)(27/85，31.76﹪)樣本中以及在3名(3.10，30﹪)健康對(duì)照者的5個(gè)(5/40，12

4、.5﹪)樣本中檢出了HCMV-DNA。在85個(gè)OLP樣本中，27個(gè)樣本HCMV陽性，其中6個(gè)樣本為HCMV和HHV-6共同陽性，其余的1例HHV-6陽性在其它樣本中單獨(dú)檢出；在40個(gè)健康對(duì)照的樣本中，5個(gè)樣本HCMV陽性，其中含有1例HHV-6陽性的樣本，HHV-6僅檢出1例。OLP組的樣本各自攜毒率依次為白細(xì)胞50﹪(8/16)、唾液25﹪(4/16)、活檢組織80﹪(4/5)、病損區(qū)脫落細(xì)胞50﹪(8/16)、非病損區(qū)脫落細(xì)胞18.