山葡萄性別相關(guān)分子標(biāo)記的篩選及性別決定基因的初步研究.pdf

1、山葡萄是葡萄屬中最抗寒的一個(gè)種，對(duì)多種歐亞種群易感的病害都有較強(qiáng)的抵抗力。它是目前國(guó)內(nèi)外葡萄抗寒和抗病育種的主要種質(zhì)資源。而野生山葡萄一般為雌雄異株，兩性花類型極為罕見(jiàn)。本研究利用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)，研究與山葡萄性別相關(guān)的分子標(biāo)記，同時(shí)將其轉(zhuǎn)化為簡(jiǎn)單實(shí)用的scAR標(biāo)記，以實(shí)現(xiàn)葡萄性別的早期鑒定，加快葡萄育種進(jìn)程。由于葡萄的性別是由性別基因決定，因此研究葡萄雌雄植株之間表達(dá)差異的基因，為進(jìn)一步研究山葡萄的性別決定和分化機(jī)制提供理論依據(jù)，

2、為克隆其性別相關(guān)基因奠定基礎(chǔ)。本研究取得了以下主要結(jié)果： 通過(guò)構(gòu)建山葡萄雌花、雄花和完全花基因池方法與AFLP技術(shù)相結(jié)合，利用64對(duì)引物對(duì)三個(gè)基因池進(jìn)行擴(kuò)增，篩選到五對(duì)具有多態(tài)性的引物，利用這五對(duì)引物對(duì)組池個(gè)體進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有引物E-AGC/M-CTG與山葡萄性別相關(guān)，利用該引物對(duì)其它已知性別的14份山葡萄種質(zhì)資源進(jìn)行驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)該引物在供試的雄花和完全花中能產(chǎn)生特異性條帶，而雌花中沒(méi)有該特異性條帶出現(xiàn)，初步證明該AFLP標(biāo)

3、記與山葡萄性別相關(guān)。 根據(jù)AFLP標(biāo)記片段序列設(shè)計(jì)特異性引物，在已知性別的85份山葡萄種質(zhì)中進(jìn)行擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)在所有的雄花和完全花中都能擴(kuò)增出人小為220bp的特異性條帶，而供試的55份雌花中，53份沒(méi)有出現(xiàn)該特異性條帶，準(zhǔn)確率為97.6％，證明該AFLP標(biāo)記成功轉(zhuǎn)換為SCAR標(biāo)記，并且可以用于以山葡萄作為親本的雜交后代性別的早期鑒定。 建立了山葡萄cDNA-AFLP體系，利用該體系研究山葡萄雌雄花問(wèn)差異表達(dá)的基因，共篩選了