全雌鯉魚(yú)育種技術(shù)及性別相關(guān)分子標(biāo)記研究.pdf

1、鯉魚(yú)的全雌育種具有重要的學(xué)術(shù)價(jià)值和顯著的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。人工誘導(dǎo)雌核發(fā)育與性逆轉(zhuǎn)相結(jié)合是全雌鯉魚(yú)育種的主要途徑，其中雌核發(fā)育魚(yú)與雜交魚(yú)的鑒別是該途徑的關(guān)鍵技術(shù)。全雌鯉魚(yú)育種的另一技術(shù)路線是先將魚(yú)苗混合轉(zhuǎn)性，然后通過(guò)性別相關(guān)分子標(biāo)記鑒別出假雄魚(yú)，前提是找到可用于鑒定遺傳性別的性別相關(guān)DNA分子標(biāo)記。建鯉是我國(guó)20世紀(jì)80年代末育成的鯉魚(yú)優(yōu)良品種，目前已成為我國(guó)鯉魚(yú)養(yǎng)殖的主導(dǎo)品種。本文以建鯉為材料進(jìn)行全雌鯉魚(yú)育種技術(shù)及性別相關(guān)分子標(biāo)記研究，具體如

2、下： 以紫外線滅活的異源精子(紅鯽精子)誘導(dǎo)建鯉進(jìn)行人工雌核發(fā)育，并采用RAPD技術(shù)對(duì)雌核發(fā)育后代進(jìn)行分析，以鑒別雌核發(fā)育魚(yú)。人工雌核發(fā)育共獲得子一代魚(yú)241尾，根據(jù)形態(tài)特征分為Ⅰ型(建鯉體型)和Ⅱ型(鯉鯽雜種體型)，各取5尾進(jìn)行RAPD分析。實(shí)驗(yàn)篩選了10種隨機(jī)引物，共擴(kuò)增得到建鯉的特征條帶35條，紅鯽的特征條帶31條，二者共有條帶26條。擴(kuò)增結(jié)果發(fā)現(xiàn)，5尾Ⅰ型魚(yú)有4尾僅出現(xiàn)建鯉特征條帶，未發(fā)現(xiàn)紅鯽特征條帶，為雌核發(fā)育魚(yú)，另一

3、尾Ⅰ型魚(yú)絕大多數(shù)擴(kuò)增帶為建鯉特征帶，但引物OPY12擴(kuò)增出一條分子量約為1220bp的紅鯽特征帶，推測(cè)系部分精子DNA片段滲入卵核所致，屬于部分雜交魚(yú)；全部Ⅱ型魚(yú)既有建鯉特征條帶，也出現(xiàn)紅鯽特征條帶，為鯉鯽雜交魚(yú)。結(jié)果表明，RAPD技術(shù)可高效、準(zhǔn)確地鑒別出異源精子誘導(dǎo)的雌核發(fā)育魚(yú)，不僅具有理論意義，而且有助于建立標(biāo)準(zhǔn)化的人工雌核發(fā)育技術(shù)，提高雌核發(fā)育魚(yú)篩選的準(zhǔn)確度和效率，促進(jìn)雌核發(fā)育技術(shù)在魚(yú)類(lèi)育種中的應(yīng)用。 采用RAPD和AFL

4、P技術(shù)，比較分析已知性別的雌雄建鯉的DNA差異，篩選性別相關(guān)的DNA分子標(biāo)記。RAPD分析選用了80個(gè)隨機(jī)引物對(duì)建鯉雌雄群體樣本進(jìn)行擴(kuò)增，從中篩選出條帶穩(wěn)定清晰的67個(gè)引物，其中有18個(gè)引物可以擴(kuò)出群體水平的性別差異分子標(biāo)記，但未發(fā)現(xiàn)個(gè)體水平的性別差異分子標(biāo)記。AFLP分析從64對(duì)引物組合中篩選出9對(duì)引物對(duì)雌雄個(gè)體進(jìn)行擴(kuò)增，電泳圖譜條帶豐富，多態(tài)性位點(diǎn)比例高。通過(guò)對(duì)反應(yīng)條件的優(yōu)化處理，在引物E-ACG／M-CAA的擴(kuò)增圖譜中找到一條雌性

5、特異的DNA條帶，分子量約323bp，雄性個(gè)體均無(wú)此條帶，初步發(fā)現(xiàn)了雌雄之間的遺傳差異，可為建鯉遺傳性別的鑒定提供參考；同時(shí)發(fā)現(xiàn)某些位點(diǎn)在雌性和雄性個(gè)體出現(xiàn)的比例存在很大差異，推測(cè)與遺傳性別有一定的關(guān)聯(lián)。另一方面，實(shí)驗(yàn)中積累了AFLP分析的大量數(shù)據(jù)，9對(duì)選擇性擴(kuò)增引物共擴(kuò)增出1097個(gè)片段，其中264個(gè)片段(24.1％)為所有雌雄個(gè)體共有條帶，其余833個(gè)(75.9％)為多態(tài)性片段，片段大小在50-450bp之間。每對(duì)引物檢測(cè)出的位點(diǎn)數(shù)