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文檔簡介
1、糖尿病業(yè)已成為全球范圍內(nèi)日益嚴(yán)重的公共健康問題,目前全球糖尿病患者約1.7億人.我國現(xiàn)有糖尿病患者約4000萬人,其中90﹪以上的患者為2型糖尿病(T2DM);而且2型糖尿病、肥胖和高脂血癥的發(fā)生率呈現(xiàn)逐年遞增并向年青化發(fā)展的趨勢.在這些疾病中,胰島素抵抗是其主要原因,脂代謝異常是它們的共同特點(diǎn).T2DM中超過80﹪的人表現(xiàn)為超重或肥胖,而超重肥胖同時(shí)又是發(fā)生2型糖尿病很強(qiáng)的危險(xiǎn)因素.肥胖和T2DM幾乎均有不同程度的脂代謝異常,即血漿游
2、離脂肪酸(free fatty acids,FFA),膽固醇(Chol),小而致密的低密度脂蛋白(LDL)和甘油三酯(TG)水平增高,而高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平降低.我們既往的研究已經(jīng)證明,生理濃度1~20倍的AA能劑量依賴性的抑制飽和脂肪酸對顆粒細(xì)胞和睪丸Leydig細(xì)胞的致凋亡作用,AA濃度高于50倍生理濃度后其本身對細(xì)胞也有毒性作用,甚至引起細(xì)胞凋亡.這一結(jié)果說明血漿中飽和脂肪酸和AA的濃度比例對于細(xì)胞的功能非常重要.
3、AA在不同濃度情況下對胰島β細(xì)胞可能有不同的作用.因此,我們推測AA可能具有拮抗飽和脂肪酸引起的胰島素分泌和合成功能的障礙以及細(xì)胞毒性作用.為此,我們選擇胰島β細(xì)胞作為研究對象,研究AA對飽和脂肪酸引起的β細(xì)胞合成和分泌胰島素功能的損傷有無保護(hù)作用,以及AA是否能拮抗飽和脂肪酸誘導(dǎo)的β細(xì)胞凋亡作用.材料與方法:胰島β細(xì)胞株NIT-1在含10﹪胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng),當(dāng)NIT-1細(xì)胞融合70~80﹪后,經(jīng)0.25﹪胰蛋白酶消化,將
4、細(xì)胞接種于24孔培養(yǎng)板內(nèi),細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)24~72h后,分別用飽和脂肪酸,包括軟脂酸(PA)和硬脂酸(SA),單不飽和脂肪酸OA,多不飽和脂肪酸亞麻酸(LnA)和花生四稀酸(AA)以及各種阻斷劑,包括環(huán)氧合酶、脂氧合酶、蛋白激酶等處理24~96 h,然后使用MTT測定活細(xì)胞數(shù);或收集細(xì)胞培養(yǎng)上清測定胰島素;或用TRIzol試劑提取細(xì)胞RNA檢測細(xì)胞Glucokinase和PDX-1基因的表達(dá)(Northern blot);或使用流式細(xì)胞儀
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