高鹽對(duì)建立大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型中MMP-2和TIMP-2的影響.pdf

1、目的：在高脂鉗夾法建立頸動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上探討高鹽在其中的作用；檢測(cè)MMP-2和TIMP-2在實(shí)驗(yàn)中的變化，從而進(jìn)一步探討高鹽對(duì)其表達(dá)的影響，進(jìn)而對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的研究、預(yù)防、治療開辟新的方法和途徑。
　　 材料與方法
　　 1將40只雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組，即正常對(duì)照組、高脂鉗夾鹽量正常組，高脂鉗夾6倍高鹽組，高脂鉗夾12倍高鹽組(除正常對(duì)照組外，各組均給予鉗夾左側(cè)頸總

2、動(dòng)脈手術(shù)和高脂飼料喂養(yǎng))，在實(shí)驗(yàn)第2、6、10周末斷尾取血測(cè)血脂并于10周末測(cè)血壓。
　　 2在鹽量不同的各組已建成的大鼠頸動(dòng)脈粥樣硬化模型基礎(chǔ)上，于10周末取左側(cè)頸總動(dòng)脈進(jìn)行HE染色及透射電鏡切片檢測(cè)以觀察動(dòng)脈病理改變。先應(yīng)用免疫組化的方法，觀察MMP-2和TIMP-2在各組頸動(dòng)脈中的表達(dá)和分布，再應(yīng)用RT-PCR的方法，觀察MMP-2mRNA、TIMP-2mRNA在各組頸動(dòng)脈中的動(dòng)態(tài)變化。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS13.0軟件

3、包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，兩組間比較采用T檢驗(yàn)，組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05表示差異顯著。
　　 結(jié)果
　　 1、血清學(xué)及血壓觀察
　　 與正常對(duì)照組相比，正常鹽及6倍鹽、12倍鹽組在2、6、10周末的TG、TC、LDL和10周末的血壓水平均增高(P<0.05)；且各組間隨著時(shí)間的推移，血脂也是逐漸增高的。
　　 2、肉眼大體觀察
　　 喂養(yǎng)10周時(shí)，正

4、常組大鼠的左頸總動(dòng)脈活體狀態(tài)下柔軟而有彈性，顏色粉紅均勻，管腔內(nèi)膜較光滑；高脂鉗夾各組的左頸總動(dòng)脈隨鹽量增加，顏色逐漸發(fā)白，增粗明顯，管壁僵硬度隨鹽量增加而增加，內(nèi)膜可見白色條紋隆起。
　　 3、 HE光鏡觀察
　　 正常大鼠血管壁層次清晰，內(nèi)膜完整，內(nèi)皮細(xì)胞無脫落，平滑肌排列整齊；高脂正常鹽組10周末可見內(nèi)皮細(xì)胞損傷脫落，平滑肌排列紊亂，內(nèi)可見泡沫細(xì)胞；高脂6倍鹽組10周末可見內(nèi)膜增厚，突出的斑塊內(nèi)含有泡沫細(xì)胞，平滑肌

5、細(xì)胞減少，深部為壞死物質(zhì)；高脂12倍鹽組10周末可見內(nèi)膜明顯增厚，突出的斑塊內(nèi)含有大量的泡沫細(xì)胞，見較大鈣化灶，深部較多壞死物質(zhì)，形成典型粥樣硬化斑塊。
　　 4、透射電鏡觀察
　　 正常對(duì)照組大鼠內(nèi)皮細(xì)胞正常，血管內(nèi)膜光滑完整，中膜平滑肌排列整齊。其余組隨鹽量增加內(nèi)皮細(xì)胞脫落、中膜平滑肌細(xì)胞紊亂依次加重，6倍鹽及12倍鹽組出現(xiàn)斑塊改變。
　　 5、免疫組化觀察
　　 MMP-2和TIMP-2主要在內(nèi)膜內(nèi)

6、皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、泡沫細(xì)胞的胞漿中表達(dá)，在正常對(duì)照組大鼠頸總動(dòng)脈組織中低水平表達(dá)，在鉗夾高脂狀態(tài)下，各組大鼠頸總動(dòng)脈組織中隨著鹽量表達(dá)水平升高，高于正常對(duì)照組(P<0.05)。
　　 6、RT-PCR觀察
　　 和正常對(duì)照組相比，鹽正常組、6倍鹽組、12倍鹽組，大鼠頸動(dòng)脈的MMP-2和TIMP-2mRNA表達(dá)依次增強(qiáng)(P<0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1.大鼠血壓和血脂隨鹽濃度增加而增高，表明在高脂狀態(tài)