大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型的制備和富氫水對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化防治作用的研究.pdf

1、動(dòng)脈硬化是指以動(dòng)脈壁增厚變硬、管腔狹窄為特征的一大類疾病，從病理學(xué)上分為小動(dòng)脈硬化、動(dòng)脈中層鈣化和動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)三種類型，動(dòng)脈粥樣硬化是其中最常見、最重要的類型，其特點(diǎn)是在動(dòng)脈內(nèi)膜受損的基礎(chǔ)上，由于脂質(zhì)和復(fù)合糖類沉積，繼發(fā)纖維組織增生，導(dǎo)致動(dòng)脈壁增厚、變硬和管腔縮小，進(jìn)而影響組織供血。臨床上常見的心肌梗死、腦梗死、間歇性跛行等均是動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致的結(jié)果。隨著人們生活水平的提高和人口老齡化進(jìn)程的加快，

2、動(dòng)脈粥樣硬化在我國(guó)的發(fā)病率逐漸上升，已經(jīng)成為危害人類健康的主要疾病之一。動(dòng)脈粥樣硬化形成的確切機(jī)制并不十分明確，目前主要有氧化應(yīng)激學(xué)說(shuō)、脂質(zhì)浸潤(rùn)學(xué)說(shuō)、損傷反應(yīng)學(xué)說(shuō)、血小板聚集和血栓形成學(xué)說(shuō)、炎癥學(xué)說(shuō)、平滑肌細(xì)胞克隆學(xué)說(shuō)等，其中氧化應(yīng)激學(xué)說(shuō)是近年基礎(chǔ)和臨床研究的熱點(diǎn)之一。氧化應(yīng)激是指機(jī)體在遭受各種有害刺激時(shí)，活性氧(Reactive oxygen species，ROS)的產(chǎn)生與抗氧化之間失衡，從而引起的組織損傷。目前一些臨床試驗(yàn)試圖通過(guò)

3、補(bǔ)充抗氧化劑（維生素C、維生素E等）來(lái)預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生并未取得預(yù)期的臨床效果，可能與未選擇最佳的抗氧化劑、抗氧化劑應(yīng)用時(shí)間相對(duì)較短、入選人群不當(dāng)?shù)纫蛩赜嘘P(guān)。氫氣是一種強(qiáng)效的抗氧化劑，具有抗氧化、抗炎、抗凋亡的性質(zhì)，大量的基礎(chǔ)和臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)，氫氣能發(fā)揮清道夫的作用，可選擇性的中和活性氧(ROS)從而起到潛在的細(xì)胞和器官保護(hù)作用[1]。本研究在成功制備大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型的基礎(chǔ)上，觀察了富氫水對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的防治作用。
　　目的

4、:建立一種簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、可重復(fù)性好的動(dòng)脈粥樣硬化模型，并在此基礎(chǔ)上觀察富氫水作為選擇性的抗氧化劑對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的防治作用，以期探討動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生機(jī)制。
　　方法:清潔級(jí)、健康、雄性、遠(yuǎn)交群(Sprague-Dawley, SD)大鼠40只，隨機(jī)分成四組:正常對(duì)照組、模型組、阿托伐他汀組、富氫水組，每組10只。適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，正常對(duì)照組給予普通飼料喂養(yǎng);模型組給予高脂飼料+腹腔注射維生素D3(Vitamin D3，VD3)+被動(dòng)

5、吸煙;阿托伐他汀組在模型組干預(yù)的基礎(chǔ)上給予阿托伐他汀5mg/Kg/d灌胃;富氫水組在模型組干預(yù)的基礎(chǔ)上每天給予富氫水5ml/次，2次/天灌胃。為消除非處理因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，正常對(duì)照組給予同VD3等量的生理鹽水腹腔注射、生理鹽水5ml/次，2次/天灌胃;模型組給予生理鹽水5ml/次，2次/天灌胃;阿托伐他汀組將藥物溶于5ml生理鹽水中灌胃，另給一次生理鹽水5ml灌胃。實(shí)驗(yàn)共12周，每周記錄大鼠體重一次。所有大鼠12周后左心室內(nèi)取血，行血總

6、膽固醇(Total cholesterol，TC)、甘油三酯(Triglycerides，TG)、高密度脂蛋白膽固醇(High-density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(Low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C)檢測(cè);取升主動(dòng)脈行蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin，HE)染色，并留取胸主動(dòng)脈的內(nèi)中膜勻漿行8-羥基脫氧鳥苷(8-

7、hydroxy-2'-deoxyguanosine，8-OHdG)檢測(cè)。
　　結(jié)果:①共有4只大鼠未完成實(shí)驗(yàn)死亡，其中模型組死亡2只，阿托伐他汀組死亡1只，富氫水組死亡1只，死亡時(shí)間均為第6至第7周，考慮死亡原因可能與大鼠厭食、體重下降、抵抗力差以及易激惹有關(guān)。②大鼠體重變化:空白對(duì)照組體重穩(wěn)步上升，12周后平均體重達(dá)419±10.34g;模型組第一周即開始下降，12周后剔除一極值后平均體重為153.71±6.68g;他汀組和富氫

8、水組體重?zé)o明顯改變，12周后平均體重分別為213.78±15.05g和211.78±12.55g。③血脂檢測(cè)結(jié)果:模型組血清TC、LDL-C分別為18.20±0.55mmol/L、8.30±0.50mmol/L，與空白對(duì)照組1.99±0.39mmol/L、0.57±0.25mmol/L相比明顯升高（P＜0.05）;阿托伐他汀組TC、LDL-C分別為3.99±0.46mmol/L、1.48±0.35mmol/L，較模型組18.20±0.5

9、5mmol/L、8.30±0.50mmol/L明顯下降(P＜0.05），但是較空白對(duì)照組1.99±0.39mmol/L、0.57±0.25mmol/L仍高(P＜0.05）;富氫水組TC、LDL-C分別為4.99±0.43mmol/L、1.83±0.23mmol/L，較模型組18.20±0.55mmol/L、8.30±0.50mmol/L明顯下降（P＜0.05），但較阿托伐他汀組3.99±0.46mmol/L、1.48±0.35mmol/

10、L升高(P＜0.05);各組間TG、HDL-C均未見明顯差異。④胸主動(dòng)脈內(nèi)中膜組織勻漿8-OHdG水平檢測(cè):模型組8-OHdG水平56.80±0.43ng/L，較空白對(duì)照組41.18±0.73ng/L明顯升高（P＜0.05）;阿托伐他汀組8-OHdG水平47.57±0.42ng/L較模型組56.80±0.43ng/L下降（P＜0.05），較空白對(duì)照組41.18±0.73ng/L明顯升高（P＜0.05）;富氫水組8-OHdG水平48.39

11、±0.48ng/L較模型組56.80±0.43ng/L下降(P＜0.05)，但較阿托伐他汀組47.57±0.42ng/L升高(P＜0.05)。⑤病理結(jié)果:模型組大鼠中7只出現(xiàn)明顯的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，HE染色后光鏡下觀察可見內(nèi)皮細(xì)胞脫落，內(nèi)中膜明顯增厚，向管腔內(nèi)凸起，可見大量的平滑肌細(xì)胞移行至內(nèi)膜下，形成纖維帽，泡沫細(xì)胞及脂質(zhì)沉積于內(nèi)膜下，呈現(xiàn)典型的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊病理特征，部分可見鈣化，外膜有小血管生成，并可見大量炎細(xì)胞聚集;另1只大鼠

12、雖未見典型動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成，但光鏡下觀察可見主動(dòng)脈內(nèi)中膜明顯增厚，平滑肌細(xì)胞增殖、排列紊亂，吞噬細(xì)胞、少量脂質(zhì)沉積。正常對(duì)照組大鼠主動(dòng)脈壁各層結(jié)構(gòu)正常，內(nèi)膜光滑，中膜彈力纖維正常。阿托伐他汀組內(nèi)膜尚光滑，中膜增厚，可見平滑肌纖維排列稍顯紊亂，未見動(dòng)脈粥樣硬化形成。富氫水組可見內(nèi)皮尚光滑，中膜平滑肌纖維排列稍顯紊亂增厚，未見動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成。
　　結(jié)論:①高脂飲食+VD3腹腔注射+被動(dòng)吸煙的方法12周后可以建立與人動(dòng)脈粥樣硬