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文檔簡介
1、目的:研制新型GnRH疫苗,并探討其對雄性SD大鼠的去勢效果。
方法:(1)在固相多肽合成儀上合成GnRH并列體(GnRH-tandem,GnRH2),高效液相色譜法(high performance liquid chromatography,HPLC)分析其純度,質(zhì)譜檢測其分子量。然后對GnRH2進(jìn)行MAP(multiple antigen peptide,MAP)修飾(GnRH2-MAP)并檢測其純度。(2)將18~20
2、d的雄性大鼠隨機(jī)分為GnRH2-MAP免疫組,GnRH2免疫組和對照組,每組30只,免疫組注射100μg/只疫苗,對照組注射50%佐劑生理鹽水溶液,每隔2W加強(qiáng)免疫一次,共免疫3次。(3)自免疫開始,每2W采集一次樣品,每次5只,收集血液并分離出血清,記錄體重、睪丸重量及體積大小,取少量睪丸組織置于4%多聚甲醛溶液內(nèi)固定。(3)采用酶聯(lián)免疫分析法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測血清中
3、GnRH抗體及睪酮水平。將睪丸組織進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋、蘇木素-伊紅(Haematoxylin-Eosin,HE)染色,光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照。
結(jié)果:(1)GnRH2-MAP純度高,達(dá)到95%以上。(2)免疫后,免疫組體重與對照組相比無顯著差異(P>0.05);免疫組大鼠血清GnRH抗體較對照組顯著升高(P<0.05),睪酮濃度顯著降低(P<0.05);但GnRH2-MAP免疫組大鼠的抗體自首次免疫后呈現(xiàn)著上升趨勢,并在個別時期
4、顯著高于GnRH2組(P<0.05),GnRH并列體免疫組在個別時期睪酮濃度與對照組無顯著差異(P>0.05)。免疫組睪丸重量及體積均顯著小于對照組(P<0.05)。(3)睪丸組織切片顯示:GnRH2-MAP組大鼠的生精小管發(fā)生萎縮,管內(nèi)結(jié)構(gòu)疏松,細(xì)胞層數(shù)及種類極少,精原細(xì)胞分化不明顯;GnRH2免疫組生精小管管腔變大,管內(nèi)細(xì)胞層數(shù)較少,具有少量精子;對照組生精小管發(fā)育良好,結(jié)構(gòu)緊密,細(xì)胞層數(shù)多,精原細(xì)胞細(xì)胞分化明顯,管腔內(nèi)含有大量精子
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