新型結核疫苗實驗研究.pdf

1、結核感染嚴重威脅著人類健康。全世界約1/3人口感染結核，其中5-10[％]會發(fā)病。更為嚴重的是近十幾年來由于多耐藥結核的播散和HIV/AIDS的蔓延，結核病發(fā)病率不斷增高。BCG是目前全球廣泛使用的唯一的結核病疫苗。盡管BCG對預防兒童嚴重的結核感染有效，但對成人肺結核的發(fā)生幾乎沒有保護效率。因此研制新型的結核疫苗刻不容緩，這對于控制結核傳染具有非常重大的意義。當前疫苗研究的主要方向是：1)研制免疫效力超過BCG的疫苗，如其它活的結核分

2、枝桿菌菌苗；2)研制亞單位疫苗，用于BCG免疫后加強免疫應答。本研究工作也包括兩個方面：重組BCG疫苗的研究和融合蛋白亞單位疫苗的研究。 1．重組BCG疫苗的研究 BCG是很好的活的疫苗載體，可以誘導較強的細胞免疫和體液免疫反應。將一些重要的結核桿菌抗原基因導入BCG，讓BCG大量表達保護性抗原，有望誘導比BCG強大而又持久的免疫保護力。本研究選擇結核分枝桿菌最重要的保護性抗原Ag85B，將可表達該基因的piV261

3、質(zhì)粒轉化入BCG中，構建了重組BCG疫苗(rBCG::Ag85B)。我們的研究表明，rBCG:Ag85B菌株可以高效表達Ag85B，用該菌株免疫小鼠，可以引起較BCG強的體液免疫和細胞免疫反應。 進一步我們觀察了rBCG::Ag85B的免疫保護效果。皮下免疫C57BL/6小鼠和豚鼠(劑量分別為5×10<'6>和5×10<'4>cfu)，8周后給予結核桿菌毒力標準株H37Rv攻擊，觀察攻擊后動物存活時間、體重變化、組織病理變化和菌

4、落計數(shù)。研究結果顯示在結核桿菌毒力株攻擊后一定時間內(nèi)(小鼠和豚鼠分別為10、12周)rBCG::Ag85B和BCG組對于結核感染均具有保護作用，二者保護效率近似，尚不能觀察到明顯差異。為了進一步區(qū)分重組BCG與BCG疫苗的保護效率差異，需要延長毒力株攻擊后觀察時間。 2．融合蛋白亞單位疫苗的研究將Ag85B、MPT64<,190-198>和Mtb8．4三種重要的保護性抗原物質(zhì)融合表達，構建了融合多肽AMM。其中MPT64<,1

5、90-198>是抗原MPT64第190-198位氨基酸，是一CD8+T細胞表位。表達純化AMM蛋白，將其和IFA混合免疫小鼠。研究表明它可以激活有效的細胞免疫和體液免疫。AMM的兩個組分Ag85B和MPT64<,190-198>均可刺激免疫小鼠脾淋巴細胞表達分泌IFN-γ。此外，和Ag85B比較，AMM誘導更高水平的體液免疫應答。 殼聚糖(Chitosan)微球體是近年來發(fā)展起來的新型粘膜藥物和疫苗運輸載體。參照文獻方法我們制備

6、了殼聚糖微球體，它可以和AMM蛋白高效結合，且不易解離。結合AMM蛋白的殼聚糖微球體直徑約5．78±0.65μ m。分別在第1、3、5周用該疫苗皮下免疫小鼠3次，最后1次免疫3周后，檢測血清抗體水平與脾細胞可分泌IFN-γ的細胞數(shù)。結果表明血清IgG(H+L)、IgG1、IgG2a水平均有所增強；免疫小鼠脾細胞受到特異性抗原刺激后，有較多的淋巴細胞分泌表達IFN-γ；尤其是用CD8<'+>T細胞表位MPT64抗原190-198位肽片段可