布氏菌病新型疫苗的初步研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:研制布氏菌病新型疫苗，為安全、有效的防治布氏菌病提供保證。方法:采用基因重組技術(shù)擴(kuò)增牛、羊、豬布氏菌保護(hù)性抗原BCSP31、BCSP39和L7/L12基因片段，及BCSP31-L7/L12和BCSP39-L7/L12融合基因片段，克隆于原核表達(dá)載體pQE30上，在IPTG作用下誘導(dǎo)重組蛋白的表達(dá)，用層析拄純化BCSP31、BCSP39和L7/L12及BCSP31-L7/L12和BCSP39-L7/L12重組蛋白抗原；擴(kuò)增布氏菌保護(hù)

2、性抗原BCSP31、BCSP39和L7/L12基因片段，及BCSP31-L7/L12和BCSP39-L7/L12抗原融合基因片段，克隆于真核表達(dá)載體pcDNA3上，轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，在G418的作用于下誘導(dǎo)外原蛋白的表達(dá)，經(jīng)狹縫雜交證實(shí)BCSP31、BCSP39、L7/L12和BCSP31-L7/L12、BCSP39-L7/L12蛋白抗原的表達(dá)；制備布氏菌病BCSP31/pcDNA3、BCSP39/pcDNA3和L7/L12/pcDNA

3、3和BCSP31-L7/L12/pcDNA3、BCSP39-L7/L12/pcDNA3單價(jià)、雙價(jià)基因疫苗，及BCSP31、BCSP39、L7/L12和BCSP31-L7/L12、BCSP39-L7/L12單價(jià)、雙價(jià)基因重組蛋白疫苗，免疫Balb/c鼠三次，再用牛、羊和豬布氏菌毒株攻擊觀察免疫應(yīng)答和免疫保護(hù)效果。結(jié)果:構(gòu)建的重組質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果與設(shè)計(jì)的序列完全一致；獲得了在原核細(xì)胞和真核細(xì)胞中表達(dá)的BCSP31、BCSP39、L7/L12和B

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