牦牛大腸埃希氏菌病蜂膠疫苗的研制.pdf

1、目前牦牛大腸埃希氏菌病疫苗的研究只有牦牛大腸埃希氏菌病鋁膠佐劑疫苗，但是鋁膠佐劑疫苗易凍結(jié)而失效，而蜂膠佐劑疫苗由于其良好的防凍性，能有效的解決在西藏高原低溫條件下疫苗的運輸和貯藏問題。因此研制蜂膠疫苗可以在西藏高原條件下有效地預防牦牛大腸埃希氏菌病。 本研究首先選用山東與四川兩種蜂膠進行試驗，兩種蜂膠均按蜂膠與乙醇的比例1∶2、1∶4、1∶5、1∶6、1∶8 分別進行提取；經(jīng)蜂膠乙醇提取物的防凍試驗結(jié)果表明：蜂膠與乙醇的比例1

2、∶4、1∶5、1∶6和1∶8 所提取的蜂膠乙醇提取物，在-28～-30℃時72h 未結(jié)冰；經(jīng)蜂膠乙醇提取比例試驗結(jié)果表明：蜂膠與乙醇的比例1∶5 進行提取，為最佳蜂膠與乙醇提取比例，且山東蜂膠提取物的效果優(yōu)于四川蜂膠。因此，作者選用山東蜂膠，按蜂膠與乙醇1∶5的比例提取的提取物，加入乳化劑和無離子水配制了3 批蜂膠佐劑（蜂膠的含量分別為20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL）。 選用西藏-9903 牦牛大腸埃希氏菌菌株，

3、進行菌液培養(yǎng)、純粹檢驗、活菌計數(shù)、甲醛滅活及無菌檢驗，按照1份滅活的菌液加入1份蜂膠佐劑，充分混勻后，于4℃靜置過夜后為蜂膠疫苗，同此方法配制3 批蜂膠疫苗，編號為200801、200802和200803（蜂膠含量分別為10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL），進行分裝及成品檢驗。結(jié)果表明，3 批牦牛大腸埃希氏菌病蜂膠疫苗：經(jīng)無菌檢驗為陰性；經(jīng)物理性狀檢驗為：靜置后上層是乳黃色液體，下層為土黃色沉淀，振蕩后呈均勻混濁液；經(jīng)安全性

4、試驗表明對家兔和西藏牦牛進行了初次接種和再次遞增劑量的接種均是安全的；經(jīng)免疫效力試驗表明對家兔和西藏牦牛均有效，免疫后機體產(chǎn)生的抗體效價在2.70927 log2～3.61236 log2 之間，具備免疫保護能力，并且根據(jù)家兔免疫效力抗體消長規(guī)律，免疫6個月后，家兔仍然具備免疫保護能力。經(jīng)防凍試驗結(jié)果表明，隨著蜂膠含量的增高，防凍效果越好。200801 批蜂膠疫苗在-18℃易結(jié)冰，而200802批蜂膠疫苗在-18℃24h 不結(jié)冰，200

5、803 批蜂膠疫苗在-18℃15d 不結(jié)冰。通過對3 批蜂膠疫苗的免疫效力試驗和防凍試驗的結(jié)果分析表明，3 批疫苗的免疫效果差異不顯著；并且200802 批蜂膠疫苗的乙醇含量較200803 批蜂膠疫苗低，并能滿足在西藏高原條件下的低溫運輸，故為首選。 200802批蜂膠疫苗與鋁膠疫苗和油乳劑疫苗的比較試驗結(jié)果表明，鋁膠疫苗的免疫效果略低于蜂膠疫苗和油乳劑疫苗，鋁膠疫苗易凍；油乳劑疫苗的免疫效果略高于蜂膠疫苗和鋁膠疫苗，但不易注射