CpG ODN作為結核分枝桿菌亞單位疫苗佐劑的研究.pdf

1、目的:CpGODN是近年出現(xiàn)的具有較強免疫刺激能力的新型佐劑。本課題擬以CpG1826和CpG7909作為佐劑,探討CpG1826和CpG7909能否增強結核分枝桿菌ESAT6-Ag85A重組亞單位疫苗(Pe685a)的免疫效應和抗結核保護效果。
　　方法:將CpG1826、CpG7909分別與Pe685a混合均勻后經(jīng)腹腔途徑免疫相應組小鼠,并設置PBS、CpG1826和CpG7909陰性對照組,弗氏不完全佐劑混合Pe685a為陽

2、性對照組。初次免疫后每間隔兩周加強免疫兩次。末次免疫2周后小鼠處死用于免疫分析:采用ELISA法檢測血清中特異性IgG抗體和相關細胞因子IFN-γ、IL-2的表達;MTT法檢測脾淋巴細胞特異性增殖;FACS檢測脾CD3+CD4+與CD3+CD8+T淋巴細胞分型;RT-PCR檢測脾臟相關細胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-6和TLR9的轉(zhuǎn)錄。末次免疫后第4周用M.tb/H37Rv毒株經(jīng)尾靜脈攻擊免疫小鼠,4周后采用肺組織病理損傷評分評價

3、各佐劑與Pe685a混合免疫對結核分枝桿菌感染小鼠的保護效果。
　　結果:與PBS組相比,CpG7909、弗氏不完全佐劑與亞單位疫苗Pe685a分別免疫小鼠后,均能誘發(fā)小鼠產(chǎn)生明顯的體液免疫和細胞免疫反應,而CpG1826則不能。同時,和弗氏不完全佐劑相比,CpG7909與亞單位疫苗Pe685a免疫小鼠,能刺激小鼠產(chǎn)生更高水平的特異性IgG抗體滴度,促進細胞因子IFN-γ、IL-2的分泌(P<0.05),增強脾淋巴細胞增殖(P<0

4、.05),誘導脾臟CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴細胞分化和增殖(P<0.05),促進脾臟中IFN-γ、TNF-α、IL-6和TLR9的轉(zhuǎn)錄(P<0.05)。然而,M.tb/H37Rv毒株攻擊免疫小鼠后,和弗氏不完全佐劑相比,CpG7909與亞單位疫苗Pe685a免疫的小鼠肺組織病理損傷的未見明顯減輕。
　　結論:兩種CpGODN中只有CpG7909能特異性增強Pe685a融合蛋白誘導的體液免疫和細胞免疫,但CpG7909