上海地區(qū)結(jié)核分枝桿菌多重感染研究.pdf

1、結(jié)核病(Tuberculosis)是一種古老的傳染性疾病，也是一種非常重要的人獸共患傳染病。結(jié)核病目前仍然嚴(yán)重危害著人類的健康，與HIV、瘧疾一同被WHO列為當(dāng)前急需解決的公共健康難題，也是我國重點(diǎn)控制的重大傳染病之一。結(jié)核分枝桿菌是引起結(jié)核病的病原菌，一般通過呼吸道傳播。由于結(jié)核病潛伏期長的特點(diǎn)，傳統(tǒng)流行病學(xué)方法對于研究結(jié)核病的傳播特點(diǎn)具有很大局限性。自二十世紀(jì)九十年代以來，應(yīng)用分子生物學(xué)方法來區(qū)分不同的結(jié)核分枝桿菌，并結(jié)合傳統(tǒng)流行病

2、學(xué)研究建立的分子流行病學(xué)使人們更好地理解結(jié)核病的傳播特點(diǎn)，為有效控制結(jié)核病提供了有效的工具。本研究應(yīng)用分子流行病學(xué)的方法，研究結(jié)核分枝桿菌感染患者的多重感染問題，對結(jié)核分枝桿菌的感染及傳播提出了新的思考。 結(jié)核病患者在不同的發(fā)病部位或者在同一病程中感染兩種或兩種以上的結(jié)核分枝桿菌菌株，稱為多重感染。多重感染的研究對藥敏結(jié)果的判斷和治療方案的評價(jià)，分子流行病學(xué)數(shù)據(jù)的解釋，對結(jié)核病的控制策略以及疫苗發(fā)展都有重要意義。本研究應(yīng)用一種新

3、的結(jié)核分枝桿菌基因分型法一可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)單元(VNTR)基因分型方法鑒定結(jié)核分枝桿菌的多重感染，并估計(jì)了上海地區(qū)普通結(jié)核病人群中結(jié)核病的多重感染率。 首先選擇Mtub21，QUB-18，QUB-11a，QUB-11b，MIRU26，VNTR3820和QUB-26這7個(gè)VNTR位點(diǎn)，這一組位點(diǎn)對上海地區(qū)的結(jié)核分枝桿菌具有較高的區(qū)分力，本研究中選擇并優(yōu)化這7個(gè)位點(diǎn)對上海地區(qū)結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行基因分型。首先評估了可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)單元(

4、VNTR)方法在結(jié)核病多重感染研究中的可行性。選擇上海市疾病預(yù)防控制中心(SCDC)結(jié)核病防治科1999年～2004年收集保存的菌株中，找出在同一治療療程中患者前后分離菌株的耐藥表型改變的病人共22例，從菌株庫中取出保存的22例病人患者的首培分離株，活化培養(yǎng)獲得菌落，煮沸法提取其基因組DNA，對菌落磨菌鋪單菌落并在4～6周后收集每個(gè)分離株30個(gè)單菌落。用該VNTR方法對22例患者的分離株進(jìn)行基因分型，找出其中多重感染病例。每個(gè)分離株的基

5、因分型結(jié)果與該分離株的30個(gè)單菌落的基因分型結(jié)果比較。結(jié)果表明：22例患者用VNTR方法直接對分離株提取的DNA分型結(jié)果發(fā)現(xiàn)有2例病例存在兩種不同的VNTR型別，提示是多重感染病例。與單菌落分型結(jié)果比較，該兩例分離株的30個(gè)單菌落之間存在兩種不同的基因型，兩種不同基因型單菌落的比例分別為24：6和29：1.驗(yàn)證了直接從分離株中鑒定多重感染的可靠性，建立了直接從分離株中鑒定多重感染的快速有效的VNTR方法。 對2006年1月到20

6、06年12月松江區(qū)、崇明縣的249例結(jié)核分枝桿菌感染病人的分離株，用建立的VNTR方法進(jìn)行基因分型。結(jié)果表明，有14例分離株中存在兩種不同的VNTR基因型，表明這14例患者分離株中存在結(jié)核分枝桿菌的多重感染。因此，本研究中入選患者中結(jié)核分枝桿菌的多重感染率為5.6％(14/249)。對14例多重感染病例與235例單一感染的病例比較分析發(fā)現(xiàn)，初治病人的多重感染率為4.1％(9/217)，而復(fù)治病人的多重感染率為15.6％(5/32)，初治

7、病人的多重感染率與復(fù)治病人的多重感染率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。復(fù)治病人比初治病人更容易產(chǎn)生多重感染，是多重感染的高危人群。多重感染病例與單一感染病例在病人的年齡，性別，耐藥情況和轉(zhuǎn)歸情況等因素上沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。北京基因型菌株中有7例菌株是多重感染菌株，多重感染率3.5％(7/200).非北京基因型菌株中有6例菌株是多重感染菌株，多重感染率12.5％(6/48)。比較北京型菌株的多重感染率和非北京基因型菌株的多重感染率結(jié)果表明，二者