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文檔簡介
1、為研究Rv0901基因的功能及其與結核桿菌毒力、致病機制的關系,我們首先將該基因528bp片段首次從基因組中擴增出,并在原核融合表達載體pGEX-1λT中成功表達了GST-Rv0901融合蛋白,為研究該基因功能奠定了基礎.經過生物信息學分析及實驗證實Rv0901為結核分枝桿菌毒力株特有的基因序列,將Rv0901基因片段通過穿梭表達載體pMV261經電轉化重組入不含該基因序列的無毒恥垢分枝桿菌(mc<'2>155),并在重組恥垢分枝桿菌(
2、Rmc<'2>155)中成功表達了19kDa的Rv0901編碼蛋白.將經誘導表達的重組恥垢分枝桿菌和未重組的恥垢分枝桿菌同時感染小鼠骨髓巨噬細胞Ana-1,在不同的時間點計數存活的細胞數和細菌數,發(fā)現(xiàn)兩菌株對細胞的活力均無明顯影響,巨噬細胞大量清除胞內細菌,但重組株比未重組株在巨噬細胞中有一定存活優(yōu)勢,被細胞清除速率較慢.進而我們將感染了重組恥垢分枝桿菌和未重組恥垢分枝桿菌的Ana-1細胞通過膜聯(lián)蛋白V(Annexin-V)和碘化丙啶(
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