Myroilysin脫細(xì)胞異種神經(jīng)支架的制備及生物力學(xué)性能研究.pdf

1、周圍神經(jīng)缺損可直接導(dǎo)致機(jī)體感覺(jué)或運(yùn)動(dòng)功能的喪失，并增加了二次并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)而嚴(yán)重影響機(jī)體正常功能的行使，有的甚至需要終生維持治療，不但影響了患者的生活質(zhì)量，甚至給社會(huì)經(jīng)濟(jì)造成了不同程度的影響。周圍神經(jīng)缺損的修復(fù)是神經(jīng)創(chuàng)傷研究的難點(diǎn)。目前，自體神經(jīng)移植(autologous nervetransplantation，ANT)仍是治療周圍神經(jīng)缺損的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但其存在來(lái)源不足，不能修復(fù)大范圍神經(jīng)缺損等缺點(diǎn)。將應(yīng)用組織工程學(xué)的方法和原理制備

2、出的脫細(xì)胞異種神經(jīng)支架，運(yùn)用于修復(fù)周圍神經(jīng)的大范圍缺損便成為此研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。本課題正是基于上述理念，制備一種新型的人工神經(jīng)移植物并對(duì)其生物力學(xué)性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　第一部分、Myroilysin脫細(xì)胞異種神經(jīng)支架的制備
　　目的:獲取一種新型的脫細(xì)胞異種神經(jīng)支架。
　　方法:獲取健康Wistar大鼠雙側(cè)坐骨神經(jīng)(15mm)后，應(yīng)用Myroilysin酶的不同活性濃度對(duì)其進(jìn)行脫細(xì)胞處理，肉眼觀察及制作組織切片經(jīng)HE染色、

3、Masson染色后光學(xué)顯微鏡下觀察此脫細(xì)胞異種神經(jīng)支架的膠原結(jié)構(gòu)、所保留神經(jīng)基底膜結(jié)構(gòu)以及整體的脫細(xì)胞效果。
　　結(jié)果:肉眼觀察可見(jiàn)高濃度的Myroilysin酶(500IU/mL，600IU/mL)所制備出脫細(xì)胞異種神經(jīng)支架已幾乎完全被溶解掉，其長(zhǎng)度較實(shí)驗(yàn)前明顯縮短，余均可見(jiàn)體積較正常神經(jīng)有明顯膨脹現(xiàn)象，且色澤透明。組織學(xué)觀察，HE染色鏡下可見(jiàn)低濃度的Myroilysin酶(200IU/mL，300IU/mL)所制備出的脫細(xì)胞異

4、種神經(jīng)支架有大量細(xì)胞核的殘留。Masson染色鏡下可見(jiàn)不同濃度Myroilysin酶所制備出的脫細(xì)胞異種神經(jīng)支架膠原纖維的排列都較規(guī)則，但隨著濃度的增高膠原纖維間的間隙逐漸增大。通過(guò)多次反復(fù)實(shí)驗(yàn)我們最終確定400IU/mL的Myroilysin酶脫細(xì)胞效果最佳。
　　結(jié)論:Myroilysin酶法是一種新型的脫細(xì)胞異種神經(jīng)支架的制備方法;且通過(guò)肉眼觀察及組織學(xué)觀察，400IU/mL的Myroilysin酶脫細(xì)胞效果最佳。
　

5、　第二部分、Myroilysin與Sondell脫細(xì)胞神經(jīng)支架的對(duì)比觀察
　　目的:比較Myroilysin酶法與Sondell化學(xué)法制備的脫細(xì)胞異種神經(jīng)支架的異同。
　　方法:獲取健康Wistar大鼠雙側(cè)坐骨神經(jīng)(15mm)后，分別應(yīng)用400IU/mLMyroilysin酶和經(jīng)典Sondell化學(xué)法對(duì)其進(jìn)行脫細(xì)胞處理。肉眼觀察并制作組織切片，切片經(jīng)HE染色及Masson染色后光學(xué)顯微鏡下觀察脫細(xì)胞異種神經(jīng)支架的膠原結(jié)構(gòu)、所

6、保留神經(jīng)基底膜結(jié)構(gòu)以及整體的脫細(xì)胞效果。同時(shí)制作電鏡標(biāo)本在掃描電鏡下觀察不同脫細(xì)胞神經(jīng)支架的表面物理性狀。
　　結(jié)果:兩種方法所獲得的神經(jīng)支架相比，Myroilysin脫細(xì)胞異種神經(jīng)支架的直徑及體積要明顯大于Sondell脫細(xì)胞神經(jīng)支架。與天然神經(jīng)相比，兩者的直徑及體積均大于天然神經(jīng)，但Myroilysin脫細(xì)胞異種神經(jīng)支架較天然神經(jīng)更明顯膨脹，且色澤透明，Sondell脫細(xì)胞異種神經(jīng)支架的直徑只略大于天然神經(jīng)。組織學(xué)觀察，HE染

7、色兩種支架均可見(jiàn)細(xì)胞核、軸突、髓鞘結(jié)構(gòu)消失;神經(jīng)基底膜結(jié)構(gòu)紅染，呈波浪狀，但與Sondell神經(jīng)支架相比， Myroilysin神經(jīng)支架排列均勻一致且連續(xù)性好。Masson染色可見(jiàn)，Sondell神經(jīng)支架膠原纖維排列不規(guī)則，且纖維結(jié)構(gòu)的連續(xù)性差，部分纖維結(jié)構(gòu)已被破壞，而Myroilysin神經(jīng)支架排列相對(duì)規(guī)則且連續(xù)。
　　結(jié)論:通過(guò)上述比較可知，Myroilysin酶法將成為一種新型的且更具有優(yōu)勢(shì)的神經(jīng)支架的制備方法。
　　

8、第三部分、Myroilysin脫細(xì)胞異種神經(jīng)支架的生物力學(xué)性能
　　目的:應(yīng)用生物力學(xué)測(cè)試儀器，評(píng)價(jià)Myroilysin脫細(xì)胞異種神經(jīng)支架的生物力學(xué)性能，為后期的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究做準(zhǔn)備。
　　方法:應(yīng)用Endura TEC ELF3200力學(xué)測(cè)試儀器，通過(guò)測(cè)試正常神經(jīng)（A組）、Sondell化學(xué)法（B組）及Myroilysin酶法（C組）獲得的脫細(xì)胞異種神經(jīng)支架的極限載荷、彈性模量、韌度、極限應(yīng)力、極限應(yīng)變、斷裂功耗等生物力學(xué)性

9、能指標(biāo)，比較三者之間的生物力學(xué)性能差異有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。測(cè)試數(shù)據(jù)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:P值均大于0.05，即A、B、C三組在極限載荷、彈性模量、韌度、極限應(yīng)力、極限應(yīng)變、斷裂功耗等生物力學(xué)特性方面的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:與Sondell脫細(xì)胞神經(jīng)支架及正常神經(jīng)相比，Myroilysi