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文檔簡介
1、本文主要從以下幾個部分展開論述:
第一部分 MassARRAY定量分析法與普通亞硫酸鹽測序法檢測乙醛脫氫酶2低甲基化基因序列效果的對比研究
目的:
通過比較MassARRAY定量分析法與普通亞硫酸鹽測序法(BSP)在大鼠ALDH2基因啟動子甲基化檢測效果,為確定適用于低甲基化基因序列檢測的最佳方式提供依據(jù)。
方法:
取10只體重為(200±10)g之間的雄性SD大鼠,分2組,每組5只,分
2、為對照組與實驗組。實驗組行心臟冠脈左前降支結(jié)扎術(shù),制備心肌梗死模型。常規(guī)飼養(yǎng)7天后同時取材,實驗組取材部位為梗死邊緣區(qū)心肌組織,對照組取材位置與實驗組相同。提取邊緣區(qū)心肌組織DNA。分別使用MassARRAY定量分析法與普通BSP法檢測兩組ALDH2基因核心啟動子上游同一段DNA序列甲基化情況。
結(jié)果:
BSP法可檢測顯示目標區(qū)域12個CpG位點,檢測結(jié)果示對照組與實驗組皆無DNA甲基化發(fā)生;MassARRAY定量分
3、析法可檢測目標區(qū)域10個CpG位點,結(jié)果提示該DNA序列在對照組及實驗組均有有輕度DNA甲基化,且實驗組5號、6號及7號CpG位點的甲基化水平與對照組存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。
結(jié)論:
對于低甲基化基因序列,MassARRAY定量分析法擁有更好的DNA甲基化檢測精度,在定量分析DNA甲基化方面優(yōu)于BSP法。ALDH2基因啟動子相關(guān)序列中的部分特殊序列需采用MassARRAY檢測方式。
第二部分 檢測缺
4、血大鼠心肌細胞乙醛脫氫酶2啟動子甲基化水平變化的基礎(chǔ)研究
目的:
探索缺血缺氧條件下,心肌乙醛脫氫酶2(ALDH2)啟動子甲基化水平的變化,并從DNA甲基化這一角度解釋缺血心肌ALDH2水平降低。
方法:
取40只體重為(200±10)g之間的雄性SD大鼠,分4組,每組10只,其中三組為心肌梗死模型組,造模方法為心臟冠脈左主干結(jié)扎術(shù),剩余一組為空白對照組。心肌梗死模型三組根據(jù)術(shù)后取材時間分為心梗一
5、周組、心梗二周組及心梗三周組。取材部位為心肌梗死邊緣心肌組織,對照組仿心梗組位置取材。分別檢測取材心肌的ALDH2蛋白表達、DNA甲基化相關(guān)調(diào)節(jié)酶、mRNA表達、心肌DNA甲基化總體水平及ALDH2啟動子相關(guān)序列甲基化水平。另取10只雄性SD大鼠,注射地西他濱(DAC)干預(yù)體內(nèi)DNA甲基化,每天以1mg/kg標準給藥,一周后取材及檢測方法同前。
結(jié)果:
與正常心肌組織相比,缺血邊緣區(qū)心肌ALDH2蛋白表達降低,mRN
6、A表達降低(P<0.05),但心肌DNA甲基化總體水平無顯著差異。與正常心肌組織相比,缺血邊緣區(qū)心肌ALDH2啟動子核心區(qū)域甲基化水平無差異,兩者均屬于未甲基化區(qū)域,該結(jié)果為BSP檢測所得。MassARRAY檢測顯示,缺血心肌ALDH2啟動子上游494bp序列存在多個甲基化異常位點(CpG1,CpG2及CpG7),其甲基化水平顯著高于正常心肌組織(P<0.05)。給予DAC干預(yù)后該區(qū)域甲基化異常位點DNA甲基化水平降低,ALDH2蛋白表
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