KATP通道開(kāi)放劑對(duì)大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖中Th1-Th2失衡的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的:氣道平滑肌細(xì)胞增殖是導(dǎo)致哮喘氣道重構(gòu)的重要原因。有研究顯示,ATP敏感性鉀通道開(kāi)放劑能糾正哮喘氣道重塑,但其機(jī)制是否與氣道平滑肌細(xì)胞增殖有關(guān),并未有系統(tǒng)性的研究報(bào)道。本課題就KATP通道開(kāi)放劑對(duì)哮喘氣道重塑的作用機(jī)制做出發(fā),研究氣道平滑肌細(xì)胞增殖過(guò)程中,TGF-β1分泌釋放水平與細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制蛋白3/5(SOCS3/5)的表達(dá)和Th1/Th2細(xì)胞分化的特異性細(xì)胞因子的關(guān)系,希望為尋找有效的哮喘治療藥物和治療靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)性的依

2、據(jù)。
　　方法:(1)從大鼠體內(nèi)分離、提取原代氣道平滑肌細(xì)胞(ASMCs),建立平滑肌細(xì)胞增殖的細(xì)胞模型:Western blotting檢測(cè)增殖型ASMCs中的α-SMA表達(dá);ELISA法檢測(cè)增殖后上清液中TGF-β1的釋放。(2)增殖型ASMCs和大鼠脾臟淋巴細(xì)胞體外共培養(yǎng):采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Th1、Th2分化表達(dá)情況;Real-timePCR檢測(cè)淋巴細(xì)胞中SOCS3mRNA及SOCS5mRNA的表達(dá)。(3) KATP通道開(kāi)放

3、劑藥物干預(yù)、處理共培養(yǎng)細(xì)胞體系,并設(shè)立對(duì)照:檢測(cè)藥物作用前后Th免疫平衡和SOCS表達(dá)變化。
　　結(jié)果:(1)成功提取大鼠氣道平滑肌細(xì)胞,并采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定細(xì)胞。(2)AngⅡ促進(jìn)ASMCs轉(zhuǎn)化為增殖型,Western blotting檢測(cè)α-SMA的表達(dá)增加,ELISA檢測(cè)TGF-β1表達(dá)升高。(3)增殖型ASMCs和淋巴細(xì)胞體外共培養(yǎng)模型中,流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果顯示增殖型的AMSCs促進(jìn)CD4+T細(xì)胞由Th1向Th2分化,

4、Th2優(yōu)勢(shì)應(yīng)答,IL-4表達(dá)升高,Th1型細(xì)胞因子IFN-γ減少,Th1/Th2平衡失調(diào)。(4)KATP通道開(kāi)放劑處理共培養(yǎng)體系后,與對(duì)照相比,上清液中TGF-β1含量降低;Th1/Th2免疫平衡指標(biāo)顯示結(jié)果與用藥前相比有明顯差異,并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。(5)Real-timePCR檢測(cè)淋巴細(xì)胞中SOCS3/5mRNA用藥前后表達(dá)同樣差異顯著(P<0.05或P<0.01)。
　　結(jié)論:以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)AS