TNF-α對(duì)哮喘模型大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖及ERK1-2活性的影響.pdf

1、目的:探討TNF—α對(duì)哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞(ASMCs)增殖及對(duì)ASMCs上ERK1/2mRNA、p—ERK1/2表達(dá)水平的影響。 方法:健康雄性Wistar大鼠，體重約250g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，采用卵清白蛋白腹腔注射致敏大鼠，兩周后用卵清白蛋白霧化吸入激發(fā)。對(duì)照組以生理鹽水代替卵清白蛋白腹腔注射和霧化吸入。哮喘模型建立后，取大鼠氣道平滑肌細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，分別以0.1μg/L、1.0μg/L、10μg/L、20μg/L T

2、NF—α干預(yù)ASMCs生長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)分為六組：(1)對(duì)照組、(2)模型組、(3)、(4)、(5)、(6)組分別為不同濃度的TNF—α干預(yù)組。采用流式細(xì)胞儀、四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)各組ASMCs增殖情況，觀察不同濃度TNF—α對(duì)ASMCs增殖的影響。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT—PCR)檢測(cè)ASMCs上ERK1/2 mRNA表達(dá)，免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)磷酸化ERK1/2蛋白的表達(dá)及定位。 結(jié)果:(1)模型組ASMCs S期比例

3、、A值、ERK1/2 mRNA、p—ERK1/2蛋白的表達(dá)量與對(duì)照組相比均顯著增高(均 P＜0．01)。各TNF—α干預(yù)組ASMCs的S期比例、A值、ERK1/2 mRNA表達(dá)量與模型組比較均顯著降低(均P＜0．01)，仍高于對(duì)照組(均P＜0．01)。各干預(yù)組p—ERK1/2蛋白表達(dá)量與模型組比較均顯著降低(均P＜0．01)，其中，10μg/LTNF—α干預(yù)組的p—ERK1/2蛋白表達(dá)量與對(duì)照組比較無差異(P＞0.05)；(2)各干預(yù)組

4、S期細(xì)胞所占比例與 TNF—α濃度之間呈劑量依賴關(guān)系，隨TNF—α干預(yù)濃度的增加，S期細(xì)胞所占比例逐漸減少；(3)直線相關(guān)性分析顯示，模型組ASMCs S期細(xì)胞比例與大鼠氣道平滑肌細(xì)胞上ERK1/2 mRNA和p—ERK1/2表達(dá)水平呈正相關(guān)(分別為r=0.717，r=0.854，P均＜0.05)。 結(jié)論:與正常鼠相比，慢性哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖明顯，處于S期的細(xì)胞比例明顯增高。經(jīng) TNF—α干預(yù)后，慢性哮喘大鼠氣道平滑肌