組胺對哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖及ERKmRNA、CyclinD1mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的:探討不同濃度組胺（Hist）對哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖的影響，及Hist對大鼠氣道平滑肌細(xì)胞ERK mRNA、CyclinD1mRNA表達(dá)的影響。
　　 方法：
　　 第一部分：卵蛋白霧化致敏4周，建立哮喘大鼠模型，HE 染色、圖像分析判斷是否形成氣道重構(gòu)。原代培養(yǎng)正常大鼠和哮喘大鼠平滑肌細(xì)胞（airway smooth musclecells，ASMCs），給予不同濃度的組胺（Hist）干預(yù)ASMCs 生長，依

2、處理方式不同分為5組:（1）正常對照組 (2）哮喘模型組；(3）0.1mmol/L Hist組；(4)0.3mmol/L Hist組；(5）0.5mmol/L Hist組。采用四甲基偶氮唑鹽(MTT）法檢測氣道平滑肌細(xì)胞（ASMCs）增殖能力，流式細(xì)胞術(shù)（FCM）測定各組大鼠ASMCs細(xì)胞周期。
　　 第二部分：原代培養(yǎng)正常大鼠和哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞，根據(jù)第一部分確定的Hist濃度0.5mmol/L和ERK 特異性抑制劑PD9

3、8059 干預(yù)ASMCs 生長，根據(jù)處理方式不同分別分為4組:(1）正常對照組；(2）哮喘模型組；(3）0.5mmol/L Hist組；(4）PD98059+Hist組：加入PD98059 10μmol/L 培養(yǎng)1小時(shí)后，加入濃度為0.5mmol/L的Hist。采用四甲基偶氮唑鹽(MTT）法檢測氣道平滑肌細(xì)胞（ASMCs）吸光度A值，RT-PCR 方法檢測ERK1/2和CyclinD1mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　

4、 第一部分：
　　 （1）肺組織HE 染色、圖像分析后哮喘模型組發(fā)生氣道重構(gòu)，模型復(fù)制成功。
　　 （2）哮喘模型組、0.1mmol/L Hist組、0.3mmol/L Hist組、0.5mmol/L Hist組與正常對照組比較,吸光度A值增高(P<0.01），G0/G1期細(xì)胞比例下降(P<0.01），S+G2 期比例升高(P<0.01）；隨著組胺濃度增加，吸光度A值增高，G0/G1期細(xì)胞比例下降，S+G2 期比例升高

5、，0.5mmol/L Hist為第二部分實(shí)驗(yàn)干預(yù)濃度。
　　 第二部分：
　　 （1）哮喘模型組、0.5mmol/L Hist組、PD98059+Hist組與正常對照組相比，吸光度A值增高(P<0.01）；PD98059+Hist組與0.5mmol/L Hist組相比，吸光度A值下降(P<0.01）；PD98059+Hist組與哮喘模型組相比，吸光度A值升高(P>0.05）。
　　 （2）哮喘組、0.5mmol/

6、L Hist組、PD98059+Hist組與正常對照組相比，ERK1/2 mRNA和CyclinD1mRNA的表達(dá)升高(P<0.05）；PD98059+Hist組與0.5mmol/L Hist組相比，ERK1/2 mRNA和CyclinD1mRNA的表達(dá)下降(P<0.05）；PD98059+Hist組與哮喘模型組相比，ERK1/2 mRNA和CyclinD1mRNA的表達(dá)升高(P>0.05）。ERK1/2 mRNA和CyclinD1mR