細胞外基質(zhì)對哮喘模型大鼠氣道平滑肌細胞中RANTES、eotaxin、TGF-β1表達的調(diào)控.pdf

1、目的：氣道慢性炎癥和氣道重塑是支氣管哮喘（簡稱哮喘）的重要特征，與氣道平滑肌的功能狀況密切相關。最新研究發(fā)現(xiàn)，氣道平滑肌細胞（airway smooth muscle cell，ASMCs）除收縮、增殖和遷移特性外，還具有重要的免疫調(diào)節(jié)功能。ASMCs能以自分泌和旁分泌的方式產(chǎn)生多種細胞因子、趨化因子、生長因子、細胞粘附分子及大量細胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM），在啟動和維持哮喘氣道炎癥和氣道重塑中起著重要

2、作用。對ASMCs免疫功能的新認識，使探討哮喘ASMCs免疫功能調(diào)控的細胞分子機制成為哮喘發(fā)病機制研究新的熱點和哮喘治療新的靶點。 體外研究表明，IL-1β、TNFα等炎癥因子可誘導非哮喘ASMCs能分泌多種免疫調(diào)節(jié)因子，如細胞因子、趨化因子、生長因子、細胞粘附分子及大量細胞外基質(zhì)。這些免疫調(diào)節(jié)因子可調(diào)節(jié)B淋巴細胞和T淋巴細胞增殖和免疫球蛋白分泌、促進嗜酸性粒細胞等炎癥細胞的募集和生存、反過來促進ASMCs自身的增殖和分化，在啟

3、動和維持哮喘氣道炎癥和氣道重塑中起著重要作用。但是，目前國內(nèi)外對調(diào)控哮喘ASMCs免疫功能的細胞分子機制尚不清楚。 氣道平滑肌及細胞外基質(zhì)作為氣道壁維持氣道結(jié)構和功能的重要組成成分，二者間的相互作用在哮喘氣道炎癥和氣道重塑中起著重要作用。在哮喘病理發(fā)展過程中不僅有ASMCs數(shù)量的增加和功能的改變，而且還有ECM量和組成的改變。在哮喘氣道ECM各組分中，纖維連接蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)、I型膠原(type I coll

4、agen，COL-1)、層粘蛋白(laminin，LA)顯著增加。ECM能調(diào)控ASMCs的生存、增殖和遷移等生物學行為。但目前國內(nèi)外尚未有ECM對哮喘ASMCs免疫功能的調(diào)控作用及調(diào)控機制的報道。調(diào)節(jié)激活正常T細胞表達和分泌細胞因子（regulated on activated normal T expressed and secreted，RANTES）、嗜酸性粒細胞特異性趨化因子（eotaxin）、轉(zhuǎn)化生長因子β1（transfor

5、ming growth factorβ1，TGF-β1）參與哮喘氣道炎癥和氣道重塑。因此本實驗擬探討ECM對哮喘模型大鼠氣道平滑肌細胞中RANTES、eotaxin、TGF-β1表達的調(diào)控作用。 方法：wistar雄性大鼠隨機分為哮喘組（8只）和正常對照組（8只）。通過卵清蛋白(OVA)致敏后，OVA激發(fā)的方法建立哮喘模型。將培養(yǎng)的大鼠氣道平滑肌細胞分別種植于涂覆有FN、LA、COL-1的培養(yǎng)瓶中。實時定量PCR和Western

6、-blot法檢測ASMCs中RANTES、eotaxin、TGF-β1 mRNA和蛋白的表達。 結(jié)果：實時定量PCR和Western-blot法的結(jié)果都表明，RANTES、eotaxin、TGF-β1這三種因子的表達，哮喘空白組的表達相對于正常對照空白組表達升高，升高具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；哮喘組內(nèi)，用ECM干預的表達顯著高于空白組，具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；在正常對照組內(nèi)，各組間表達無差異性（p>0.05）。