PI3K在細(xì)胞外基質(zhì)對被動致敏的人氣道平滑肌細(xì)胞免疫功能調(diào)控中的作用.pdf

1、目的：
　　 氣道慢性炎癥和氣道重塑是支氣管哮喘(簡稱哮喘)的重要特征，與氣道平滑肌細(xì)胞(airway smooth muscle cell，ASMC)的功能狀況密切相關(guān)。最新研究發(fā)現(xiàn)，ASMC 除了具有收縮、增殖和遷移等特性外，還具有重要的免疫調(diào)節(jié)功能。ASMC能以自分泌和旁分泌的方式產(chǎn)生多種細(xì)胞因子、趨化因子、生長因子、細(xì)胞粘附分子及大量的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)，在啟動和維持哮喘氣道炎

2、癥和氣道重塑中起著重要作用。對ASMC 免疫功能的新認(rèn)識，使探討哮喘ASMC 免疫功能調(diào)控的細(xì)胞分子機(jī)制成為哮喘發(fā)病機(jī)制研究的新熱點和哮喘治療的新靶點。
　　 體外研究表明，IL-1 β、TNF α等炎癥因子可誘導(dǎo)非哮喘ASMC分泌多種免疫調(diào)節(jié)因子，如細(xì)胞因子、趨化因子、生長因子、細(xì)胞粘附分子及大量的ECM。這些免疫調(diào)節(jié)因子可調(diào)節(jié)B 淋巴細(xì)胞和T 淋巴細(xì)胞增殖與免疫球蛋白分泌、促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞的募集和生存，反過來促進(jìn)A

3、SMC 自身的增殖和分化，在啟動和維持哮喘氣道炎癥和氣道重塑中起著重要作用。但是，目前國內(nèi)外對調(diào)控哮喘ASMC 免疫功能的細(xì)胞分子機(jī)制尚不十分清楚。
　　 氣道平滑肌和ECM 作為氣道壁維持氣道結(jié)構(gòu)和功能的重要組成成分，二者間的相互作用在哮喘氣道炎癥和氣道重塑中起著重要作用。在哮喘病理發(fā)展過程中不僅有ASMC 數(shù)量的增加和功能的改變，而且還有ECM 量和組成的變化。在哮喘氣道ECM各組分中纖維連接蛋白(fibronectin，F(xiàn)

4、N)、I型膠原(type I collagen，Col I)、層粘蛋白(laminin，LA)顯著增加。ECM能調(diào)控ASMC的生存、增殖和遷移等生物學(xué)行為。但目前國內(nèi)外關(guān)于ECM對哮喘ASMC 免疫功能的調(diào)控作用及調(diào)控機(jī)制的報道尚少見。
　　 磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide 3-kinase PI3K)是細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的一種關(guān)鍵酶，是細(xì)胞外信號與細(xì)胞核反應(yīng)間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的共同通路，參與ASMC的生存、增殖

5、、遷移和表型轉(zhuǎn)化。但是PI3K是否參與ASMC的免疫功能調(diào)節(jié)國內(nèi)外尚少見報道。本實驗通過細(xì)胞外基質(zhì)纖維連接蛋白(fibronectin,FN)和I型膠原(collagenI,Col I)以及PI3K 抑制劑LY294002 來干預(yù)哮喘血清被動致敏的HASMCs,探討PI3K是否參與ECM對被動致敏的HASMCs 免疫功能的調(diào)控,為進(jìn)一步闡明哮喘的發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 將人氣道平滑肌細(xì)胞(human

6、airway smooth muscle cells,HASMCs)接種在用FN 或Col I包被的培養(yǎng)瓶或空白培養(yǎng)瓶中，加入10[％]哮喘患者血清被動致敏HASMCs,以10[％]非哮喘者血清為對照,在加入血清前用PI3K 抑制劑(LY294002)預(yù)處理HASMCs30min。采用RT-PCR法檢測HASMCs RANTES、Eotaxin、TGF-β1 mRNA表達(dá)；ELISA法測定HASMCs 培養(yǎng)上清中RANTES、Eotax

7、in、TGF-β1蛋白水平。
　　 結(jié)果：
　　 (1)與單純對照血清組比較，單純哮喘血清組，對照血清+FN組，對照血清+Col I組HASMCs RANTES、Eotaxin、TGF-β1 mRNA的表達(dá)和HASMCs 培養(yǎng)上清中蛋白分泌均增高(p<0.05)。
　　 (2)哮喘血清+FN組，哮喘血清+Col I組HASMCs中,RANTES、Eotaxin、TGF-β1 mRNA的表達(dá)和HASMCs 培養(yǎng)上清