Myosin Ⅹ在細胞外基質(zhì)降解過程中作用的研究.pdf

1、肌球蛋白X(Myosin X,Myo X)是重要的細胞內(nèi)分子馬達,現(xiàn)有的研究表明在神經(jīng)發(fā)育系統(tǒng)中Myo X調(diào)節(jié)神經(jīng)突起的生長,調(diào)節(jié)絲狀偽足的穩(wěn)定,從而提高細胞的游走性,并且在BMP6信號途徑中起著重要的作用。而本文是在體外研究Myo X對乳腺癌細胞系降解細胞外基質(zhì)和侵襲能力的影響。
　　 通過對兩株轉(zhuǎn)移能力不同乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-231進行Realtime-PCR和Western Blot在mRNA和蛋白水平上檢

2、測Myo X的表達,結(jié)果顯示,在高侵襲能力的MDA-MB-231細胞中Myo X高表達,預示Myo X可能與腫瘤侵襲能力有關(guān)。
　　 高侵襲的MDA-MB-231細胞能形成侵入性偽足降解細胞外基質(zhì),這種偽足是導致惡性腫瘤侵襲性生長的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)。Cortactin是侵入性偽足的關(guān)鍵蛋白,與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移都有關(guān)。通過標記內(nèi)源性Myo X與cortactin,發(fā)現(xiàn)在乳腺癌細胞的細胞質(zhì)、絲足和周邊共定位。通過對細胞外基質(zhì)降解的研究,發(fā)現(xiàn)

3、Myo X在侵入性偽足中定位,為進一步研究Myo X在腫瘤侵襲過程中的作用打下了基礎。
　　 為了深入的了解Myo X在腫瘤侵襲過程中的作用,構(gòu)建了慢病毒包裝的沉默載體Myo X-shRNA,在HEK293FT細胞中包裝慢病毒,分離純化病毒,檢測其滴度達107TU／ml。通過慢病毒反復侵染MDA-MB-231細胞,轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細胞效率達到90％以上,然后進行Matrigel侵襲能力分析,發(fā)現(xiàn)沉默Myo X后腫瘤細胞的