細胞外基質(zhì)蛋白Mindin在CMT93細胞中的抑癌作用.pdf

1、目的：探討細胞外基質(zhì)蛋白Mindin在小鼠大腸癌發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)功能及其相關(guān)的信號通路。
　　方法：本研究通過構(gòu)建Mindin基因的表達質(zhì)粒和Mindin-SiRNA表達載體，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染小鼠大腸癌細胞系CMT93，利用G418和嘌呤霉素篩選出干擾質(zhì)?；蛘哌^表達的穩(wěn)定細胞株；利用半定量RT-PCR、Western-blot等方法檢測Mindin基因在mRNA和蛋白水平的表達變化情況。通過 Transwell小室、MTT等技術(shù)方法分別

2、探討Mindin在CMT93細胞中對其遷移、侵襲和增殖方面的變化情況。同時構(gòu)建動物模型，把干擾或過表達Mind in后的CMT93細胞注射在C57BL/6小鼠皮下，觀察其成瘤的生長情況。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建了Mindin的表達質(zhì)粒和干擾質(zhì)粒；用 RT-PCR和Western-blot方法驗證了Mindin干擾和過表達的細胞株中基因表達效果有差異，并具有顯著性的意義；Transwell小室和MTT法等實驗發(fā)現(xiàn)大腸癌細胞CMT93在干

3、擾Mindin后，細胞的遷移和侵襲能力增強，增殖能力提高，而在Mindin過表達的細胞株中結(jié)果則相反，均表現(xiàn)為下降的趨勢。在體內(nèi)實驗中，觀察小鼠皮下成瘤的生長情況顯示，注射干擾Mindin細胞的瘤體較對照組更大，而注射過表達的細胞后瘤體更小。同時，發(fā)現(xiàn)與對照組相比，干擾Mindin的細胞株中ERK1/2的磷酸化水平升高，反之，過表達者磷酸化水平則下降。
　　結(jié)論：Mindin在體內(nèi)外對小鼠大腸癌細胞CMT93的遷移、侵襲和增殖能力