細(xì)胞外基質(zhì)因子在兔軟骨細(xì)胞損傷模型中的表達(dá)變化.pdf

1、目的：獲取、培養(yǎng)體外兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞；建立軟骨細(xì)胞損傷模型并分析兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞損傷模型中細(xì)胞外基質(zhì)因子 II型膠原（Col-II），基質(zhì)金屬蛋白酶3（MMP13），基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1（TIMP1）和透明質(zhì)酸（HA）基因mRNA五個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)變化。
　　方法：取健康4周齡新西蘭大白兔，雌雄均可，麻醉之后，無菌環(huán)境解剖雙膝關(guān)節(jié)，收集軟骨細(xì)胞。體外培養(yǎng)獲取的軟骨細(xì)胞，并將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞傳代，之后接種于六孔板培養(yǎng)，制備損傷模型。

2、用顯微鏡觀察損傷前和損傷后1、3、5、7 d共5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的軟骨細(xì)胞的形態(tài)變化并拍照。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)軟骨細(xì)胞損傷前和損傷后1、3、5、7 d共5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的II型膠原酶，基質(zhì)金屬蛋白酶3，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1和透明質(zhì)酸基因mRNA表達(dá)變化。
　　結(jié)果：兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞損傷模型被成功制備。損傷后Ⅱ型膠原mRNA1 d組表達(dá)比正常細(xì)胞水平少(P<0.05)，損傷后3 d組與7d組較1 d組增多，在第7天時(shí)，恢復(fù)到正常水平。與正

3、常組相比，損傷后1天組MMP13 mRNA表達(dá)下降，約為正常組的1/47，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)，損傷后3天組和5天組較1天組上升，5天組高于3天組5倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)，高于7天組31倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TIMP1 mRNA損傷后1天組比正常組表達(dá)升高，損傷后3天組低于1天組和5天組，1天組高于3天組2倍，5天組高于3天組2倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)，損傷3天后基因升高，第7天達(dá)到正常水平。損傷后