“短刺加電針法”對膝骨關節(jié)炎模型兔軟骨細胞外基質的修復作用研究.pdf

1、目的:觀察“短刺加電針法”對膝骨關節(jié)炎模型兔血清中CTX-II、PIICP含量與膝關節(jié)軟骨中II型膠原(Collagen Type II)—盤狀結構域受體（discoidin domain receptor,DDR）-2基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）13信號通路的影響，探討該治療方法修復膝關節(jié)軟骨細胞外基質的可能作用機制。
　　方法:將40只新西蘭大白兔隨機分為正常組（10只）和造模組（

2、30只），造模組動物采用 Hulth-Telhag法手術復制膝骨關節(jié)炎模型，Lequesne MG膝關節(jié)級別評估法對各組兔進行評價，X線評估造模結果。將造模成功的動物隨機分為3組，即模型組、短刺組、普通針刺組，每組10只。短刺組采用短刺加電針法，普通針刺組采用常規(guī)針刺加電針法治療，均選取“內膝眼”、“犢鼻”、“陰陵泉”、“足三里”和“梁丘”進行針刺。正常組和模型組正常抓取、固定，不予以干預。每次治療20min，每日1次，5d為一療程，每

3、個療程間隔2d，共治療4個療程。療程結束后，Lequesne MG法再次評估各組兔膝關節(jié)級別，并對各組動物進行膝關節(jié)半月板及軟骨取材。行HE染色，于光鏡下觀察軟骨細胞的變化；行鉛鈾雙重染色，于透射電鏡下觀察關節(jié)軟骨超微結構和細胞器結構的變化。采用蛋白免疫印跡法檢測軟骨DDR2、II型膠原、MMP13的蛋白表達；免疫組化法檢測軟骨DDR2、II型膠原、MMP13的表達；逆轉錄聚合酶鏈式反應檢測DDR2和MMP13的mRNA表達；酶聯(lián)免疫吸

4、附測定法檢測血清PIICP、CTX-II含量。
　　結果:
　　1.X線結果顯示，造模組兔膝關節(jié)較正常組改變明顯，造模組兔膝關節(jié)對線不良，內側關節(jié)間隙狹窄，關節(jié)面粗糙變形，關節(jié)邊緣有骨贅形成。
　　2.光鏡下觀察HE染色結果顯示，與正常組相比，模型組軟骨細胞排列紊亂，細胞成簇出現(xiàn)，細胞核裂解退化明顯；與模型組相比，短刺組和普通針刺組軟骨細胞排列尚齊，成簇存在。透射電鏡檢查結果顯示，與正常組相比，模型組軟骨細胞核固縮，細

5、胞外基質中膠原纖維排列不齊或降解；與模型組相比，短刺組和普通針刺組軟骨細胞核形態(tài)較正常，基質中膠原纖維較豐富。
　　3.Lequesne MG評分結果顯示，造模后6周，模型組、短刺組和普通針刺組兔膝關節(jié)均出現(xiàn)強烈的局部疼痛反應，關節(jié)腫脹明顯且活動度多在15-45度。與正常組相比，模型組、短刺組和普通針刺組Lequesne MG評分均顯著增高（P＜0.01）；造模后10周，短刺組和普通針刺組兔膝關節(jié)局部疼痛刺激反應、膝關節(jié)腫脹程度均

6、減輕，活動度可達45-90度。與造模后6周同組別兔Lequesne MG評分相比均明顯降低（P＜0.01）。
　　4.Western-Blot、免疫組化、RT-PCR、ELISA結果顯示，與正常組相比，模型組、短刺組和普通針刺組兔血清中PIICP含量與膝關節(jié)軟骨中 II型膠原的蛋白表達等均明顯減少（均P＜0.01），而血清中CTX-II含量與膝關節(jié)軟骨中DDR2、MMP13的蛋白及mRNA表達均明顯增加（均P＜0.01）；治療后，

7、短刺組和普通針刺組兔血清中PIICP含量與膝關節(jié)軟骨中II型膠原的蛋白表達等較模型組明顯增多（均P＜0.01），而血清中CTX-II含量與膝關節(jié)軟骨中DDR2、MMP13的蛋白及mRNA表達較模型組均明顯減少（均P＜0.01）；與普通針刺組相比，短刺組兔血清中PIICP含量與膝關節(jié)軟骨中II型膠原的蛋白表達增多（P＜0.01），而血清中CTX-II含量與膝關節(jié)軟骨中DDR2、MMP13的蛋白及mRNA表達減少（均P＜0.01）。