鹽酸氨基葡萄糖聯(lián)合姜黃素對兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、背景
　　骨性關(guān)節(jié)炎是中老年人中常見的一種慢性退行性病變，以關(guān)節(jié)退行性變和輕度紊亂，并伴有關(guān)節(jié)軟骨進(jìn)行性損傷為主要特點(diǎn)，雖病因不同，但具有相似的生物學(xué)、形態(tài)學(xué)和臨床表現(xiàn)，其中，膝關(guān)節(jié)是最容易受累的部位，導(dǎo)致關(guān)節(jié)慢性疼痛、功能障礙，甚至喪失勞動能力，嚴(yán)重危害中老年人中生活質(zhì)量，給家庭和社會帶來沉重負(fù)擔(dān)。目前，骨性關(guān)節(jié)炎的臨床治療主要以一線藥物的應(yīng)用為主，但長期服用會帶來一系列弊端，甚至加重病情，因此，尋找有效且副反應(yīng)少的治療藥物顯得

2、尤為重要。本研究利用動物模型將二線治療藥物鹽酸氨基葡萄糖與中藥姜黃素進(jìn)行聯(lián)合治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎，對軟骨細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)基因的影響進(jìn)行了探討。
　　目的
　　構(gòu)建大白兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型，研究膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞凋亡情況，分析鹽酸氨基葡萄糖和鹽酸氨基葡萄糖聯(lián)合姜黃素對膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡的影響，探討鹽酸氨基葡萄糖和鹽酸氨基葡萄糖聯(lián)合姜黃素對膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax和P53表達(dá)情況的影響，并進(jìn)一步從基因水平

3、分析鹽酸氨基葡萄糖和鹽酸氨基葡萄糖聯(lián)合姜黃素對膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax和P53表達(dá)水平的影響。
　　方法
　　40只大白兔隨機(jī)分為空白對照組（A組），模型組（B組），鹽酸氨基葡萄糖治療組（C組），鹽酸氨基葡萄糖聯(lián)合姜黃素治療組（D組），每組10只，B、C、D組采用改良Hulth法復(fù)制膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎動物模型，A組作為空白對照組。4周后模型建好開始，C組每天進(jìn)行100mg/kg鹽酸氨基葡萄糖灌胃、等量生理鹽

4、水進(jìn)行關(guān)節(jié)內(nèi)注射，D組除每天進(jìn)行100mg/kg鹽酸氨基葡萄糖灌胃外，每周進(jìn)行5％姜黃素溶液9mg/kg膝關(guān)節(jié)內(nèi)注射，A組和B組給予等量生理鹽水進(jìn)行關(guān)節(jié)內(nèi)注射，四組均連續(xù)進(jìn)行4周。之后將試驗動物處死，取四組兔膝關(guān)節(jié)軟骨標(biāo)本，利用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的原位末端平移法對四組兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡情況進(jìn)行檢測，采用免疫組化的方法對四組兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中Bcl-2、Bax和P53蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測，利用RT-PCR實驗方法對四組兔膝關(guān)節(jié)軟骨

5、細(xì)胞中Bcl-2、Bax和P53基因表達(dá)水平情況進(jìn)行分析。
　　結(jié)果
　　1.動物模型構(gòu)建情況:40只大白兔均完成了整個實驗過程，未出現(xiàn)中途死亡情況，30只OA動物模型均成功建立。
　　2.四組兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡情況:四組兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡率間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，經(jīng)LSD-t組間兩兩比較，B組、C組和D組AI值均高于A組(P＜0.05)，C組和D組AI值均低于B組(P＜0.05)，D組AI值低于C組

6、(P＜0.05)。
　　3.四組兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況:四組兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中Bcl-2蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，采用LSD-t檢驗，四組間兩兩比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，B組、C組和D組均低于A組，C組和D組均高于B組，D組高于C組;四組兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中Bax蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，經(jīng)LSD-t組間兩兩比較，B組、C組、和D組均高于A組(P＜

7、0.05)，C組和D組均低于B組(P＜0.05)，D組低于C組(P＜0.05);四組兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中P53蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，采用LSD-t檢驗對組與組之間進(jìn)行比較，B組、C組和D組均高于A組(P＜0.05)，C組和D組均低于B組(P＜0.05)，D組低于C組(P＜0.05)。
　　4.四組兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)情況:采用RT-PCR對Bcl-2、Bax和P53基因表達(dá)情況進(jìn)行檢測，四

8、組兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中Bcl-2基因在各組中表達(dá)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），經(jīng)LSD-t組間兩兩比較，B組、C組、D組表達(dá)水平均低于A組(P＜0.05)，C組和D組表達(dá)水平均高于B組，D組高于C組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);四組兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中Bax在各組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，經(jīng)LSD-t組間兩兩比較，B組、C組和D組表達(dá)水平均高于A組(P＜0.05)，C組和D組均低于B組(P＜0.05)，D組低于C組

9、(P＜0.05);P53在四組兔膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中表達(dá)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，經(jīng)LSD-t組間兩兩比較，B組、C組和D組均高于A組（P＜0.05），C組和D組均低于B組(P＜0.05)，D組低于C組(P＜0.05)。
　　結(jié)論
　　1.采用改良Hulth法可以成功復(fù)制大白兔膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎模型;
　　2.大白兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞發(fā)生凋亡，凋亡細(xì)胞發(fā)生率遠(yuǎn)高于未發(fā)生關(guān)節(jié)炎的對照組;
　　3.大白兔

10、膝骨關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax和P53表達(dá)發(fā)生改變，Bcl-2蛋白表達(dá)陽性率較對照組降低，Bax蛋白表達(dá)陽性率較對照組升高，P53表達(dá)陽性率較對照組升高，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);
　　4.利用RT-PCR技術(shù)，大白兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞中Bcl-2基因表達(dá)較對照組降低，Bax基因表達(dá)較對照組升高，P53基因表達(dá)較對照組升高，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);
　　5.鹽酸氨