電針治療對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨IL-1β表達(dá)的影響.pdf

1、目的:骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是一種常見的中老年人多發(fā)疾病,以關(guān)節(jié)軟骨進(jìn)行性變性和破壞及骨贅形成為病理特點(diǎn),軟骨中IL-1β被認(rèn)為在OA發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。IL-1β是IL-1家族成員之一,IL-1β通過(guò)與軟骨細(xì)胞膜上IL-1RI及IL-1R輔助蛋白(IL-1RAcP)結(jié)合形成受體復(fù)合物, IL-1RI與IL-1RAcP在細(xì)胞域間異二聚化,通過(guò)第二信使(cAMP、GTP)等信息傳遞系統(tǒng),激活I(lǐng)L-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。

2、在正常軟骨中和正常的滑膜組織細(xì)胞IL-1β量很少,但在OA軟骨中則有較高水平的表達(dá)。膝關(guān)節(jié)周圍分布了很多穴位,通過(guò)電針對(duì)它們的刺激,能有效促進(jìn)機(jī)體對(duì)內(nèi)源性鎮(zhèn)痛物質(zhì)的釋放,起到明顯緩解疼痛的作用,同時(shí)促進(jìn)血液循環(huán),疏通經(jīng)脈,利于關(guān)節(jié)軟骨再生修復(fù)和周圍組織滲液的吸收。本課題通過(guò)觀察電針治療對(duì)兔膝OA的軟骨大體形態(tài)變化、軟骨細(xì)胞病理改變,以及對(duì)軟骨IL-1β表達(dá)的影響,探討電針對(duì)兔膝OA模型軟骨細(xì)胞修復(fù)的影響及作用機(jī)制。方法:(1)對(duì)象和干預(yù)

3、措施:健康新西蘭大白兔(雄性)60只,隨機(jī)抽取20只為正常對(duì)照組,不造模,其余40只兔隨機(jī)分為模型組20只和電針治療組20只。模型組和電針治療組均采用伸直位管型石膏固定左膝關(guān)節(jié),上至腹股溝平面下1.5CM,下至踝關(guān)節(jié)下3CM,建立OA模型,正常對(duì)照組和模型組于喂養(yǎng)6w后采用空氣栓塞法處死,切開左膝關(guān)節(jié),取內(nèi)側(cè)髁軟骨觀察造模后相關(guān)指標(biāo)變化,治療組在進(jìn)行電針治療15d后以同樣方法觀察治療后相關(guān)指標(biāo)改變情況。電針治療分別選取兔左下肢內(nèi)膝眼,外

4、膝眼,足三里,梁丘五個(gè)穴位,每天固定時(shí)間進(jìn)行上述穴位電針治療25分鐘,持續(xù)治療15天。(2)觀察指標(biāo):①切取實(shí)驗(yàn)兔左膝關(guān)節(jié),肉眼觀察各組關(guān)節(jié)軟骨的形態(tài)變化。②選取股骨內(nèi)側(cè)髁軟骨作為標(biāo)本,固定,包埋,切片,分別行HE染色及甲苯胺藍(lán)染色,對(duì)照Mankin’s評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分析。③免疫組織化學(xué)分析:用兔抗IL-1β試劑盒對(duì)IL-1β在關(guān)節(jié)軟骨中的表達(dá)變化進(jìn)行檢測(cè).(3)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:用SPSS16.0 for WINDOWS進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所得數(shù)

5、值結(jié)果采用x±s表示,以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P<0.01有顯著性差異。結(jié)果:(1)軟骨大體觀察:正常對(duì)照組左膝關(guān)節(jié)無(wú)明顯關(guān)節(jié)積液,外觀軟骨面光滑呈蘭白色,色深明亮,無(wú)裂紋,軟骨結(jié)構(gòu)Mankin’s評(píng)分為0分。模型組出現(xiàn)異常關(guān)節(jié)積液,此時(shí)關(guān)節(jié)面多出現(xiàn)粗糙糜爛,并且色澤暗淡,呈灰黃色,表面凹凸不平;電針治療組關(guān)節(jié)軟骨改變呈粗糙,很少出現(xiàn)糜爛,并且粗糙程度輕微,大部分可出現(xiàn)關(guān)節(jié)腔積液和滑膜增生大部分動(dòng)物出現(xiàn)關(guān)節(jié)積液,同時(shí)表現(xiàn)滑膜增生;

6、模型組與電針治療組均嚴(yán)格參照Mankin’s評(píng)分,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。(2)HE染色光鏡觀察軟骨細(xì)胞形態(tài):正常對(duì)照組軟骨光滑,厚薄均勻,軟骨細(xì)胞形態(tài)一致,大小相同,有序排列,潮線也同樣表現(xiàn)完整;模型組軟骨表層糜爛變色,厚度較正常組明顯變薄,細(xì)胞數(shù)目減少,形態(tài)不規(guī)整,大小不均一,潮線出現(xiàn)明顯紊亂;電針治療組軟骨表面相對(duì)較均勻整齊,厚度稍微增厚,軟骨細(xì)胞形態(tài)大部分比較規(guī)整,少數(shù)出現(xiàn)紊亂,但程度較輕,潮線也同樣大部分完整,少許出現(xiàn)

7、紊亂。(3)甲苯胺藍(lán)染色病理學(xué)觀察蛋白多糖和膠原等基質(zhì)變化:正常組染色均勻,基質(zhì)無(wú)失染;模型組染色明顯變淺,且極不均勻,基質(zhì)明顯失染;治療組染色輕度減退,基質(zhì)少許失染。按Mankin’s評(píng)分正常對(duì)照組與模型組、模型組與電針治療組間比較,差異均有顯著性(P<0.01)。(4)軟骨免疫組化IL-1β測(cè)定情況:正常對(duì)照組僅表層軟骨細(xì)胞內(nèi)偶見IL-1β弱陽(yáng)性表達(dá),為胞質(zhì)內(nèi)少許黃褐色顆粒;模型組的軟骨基質(zhì)、胞漿中均有IL-1β表達(dá),全層可見,尤以

8、中層密度最高,成熟軟骨細(xì)胞中較多,為深黃褐色顆粒;電針治療組中,軟骨表層可見散在的軟骨細(xì)胞胞漿中存在IL-1β表達(dá),為淺黃褐色顆粒。正常對(duì)照組與模型組、模型組與電針治療組間比較,差異均有顯著意義(P<0.01)。結(jié)論:(1)采用伸直位管型石膏固定法制作兔膝OA模型能較好地模擬OA的發(fā)病過(guò)程,本實(shí)驗(yàn)中造模成功。(2)IL-1β具有促進(jìn)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)降解的作用,對(duì)加重軟骨損傷、破壞有