抑制PLC-γ1能促進(jìn)人骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的合成.pdf

1、目的：旨在探討磷脂酶C-γ1（phospholipase C-γ1）在人骨性關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)疾病發(fā)展過(guò)程中的作用。
　　方法：本研究通過(guò)從手術(shù)廢棄材料中獲得正常膝關(guān)節(jié)及骨關(guān)節(jié)炎患者軟骨，分離出軟骨細(xì)胞，并進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，應(yīng)用蛋白免疫印跡（western blotting）技術(shù)，檢測(cè)正常與OA軟骨細(xì)胞中plc-γ1、磷酸化plcγ1及其下游分子（sox-9、mmp13)的差異；免疫組化方法檢測(cè)plcγ1在O

2、A與正常對(duì)照組之間表達(dá)差異；加入U(xiǎn)73122（plcγ1抑制劑），檢測(cè)下游分子（sox-9 mmp13 Agg Col II）表達(dá)變化；設(shè)計(jì)并合成針對(duì)plcγ1的siRNA序列，轉(zhuǎn)染人OA軟骨細(xì)胞，干擾plcγ1的表達(dá)；最后使用DAG和IP3相應(yīng)的抑制劑處理細(xì)胞，用western blotting技術(shù)檢測(cè)這些信號(hào)通路蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：plcγ1在骨性關(guān)節(jié)炎患者的軟骨組織及軟骨細(xì)胞中的表達(dá)高于相應(yīng)的正常對(duì)照組。Plcγ1與

3、OA患者軟骨細(xì)胞外基質(zhì)合成密切相關(guān)，進(jìn)一步應(yīng)用U73122（plcγ1抑制劑）或者siRNA技術(shù)降低plcγ1，均能促進(jìn)OA患者軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的合成；并且在調(diào)節(jié)基質(zhì)合成中，plcγ1下游的 IP3/Ca2+/CamK信號(hào)軸強(qiáng)于DAG/PKCδ軸，其可通過(guò)激活mTOR/P70S6K/S6，進(jìn)而參與軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的合成。
　　結(jié)論：plcγ1參與了OA患者軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的合成，而且plcγ1水平的降低能夠促進(jìn)軟骨細(xì)胞外基質(zhì)合成，plc