脂聯(lián)素在氣道平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡中的作用及對AMPK活性的影響.pdf

1、目的:研究脂聯(lián)素對氣道平滑肌細(xì)胞(ASMCs)增殖和凋亡的作用以及對AMPK活性的影響。
　　 方法:體外培養(yǎng)大鼠氣道平滑肌細(xì)胞:RT-PCR法檢測ASMCs脂聯(lián)素受體的表達(dá)情況;將體外培養(yǎng)的大鼠ASMCs于濃度為5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml的脂聯(lián)素中分別孵育48小時(shí)后,MTT法監(jiān)測吸光值,計(jì)算出細(xì)胞抑制率;將體外培養(yǎng)的大鼠ASMCs于濃度為5μg/ml、10μg/ml、20μg/

2、ml、40μg/ml的脂聯(lián)素中孵育48小時(shí)后用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞的凋亡率;不同濃度脂聯(lián)素(5、10、20及40μg/Ml)作用于氣道平滑肌細(xì)胞48小時(shí)后提取蛋白,Western Blot法檢測一磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)及磷酸化一磷酸腺苷活化蛋白激酶(p-AMPK)的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.RT-PCR法檢測脂聯(lián)素受體的表達(dá)PCR產(chǎn)物電泳示AMSCs有脂聯(lián)素受體AdipoR1的267bp片段、AdipoR2

3、的347bp片段的表達(dá),說明AMSCs細(xì)胞膜上存在脂聯(lián)素受體。
　　 2.脂聯(lián)素對ASMCs增殖的影響5-80μg/ml脂聯(lián)素作用于ASMCs48小時(shí)后,各濃度組OD值較空白對照組顯著降低(P＜0.05)。脂聯(lián)素對ASMCs的抑制率與濃度均存在相關(guān)性,Pearson相關(guān)分析得出r=0.652,P＜O.01。80μg/ml的脂聯(lián)素抑制率最高。
　　 3.脂聯(lián)素對ASMCs凋亡的影響5-40μg/ml的脂聯(lián)素作用于ASMCs

4、48小時(shí)的凋亡率明顯高于空白對照組,且凋亡率與脂聯(lián)素呈濃度依賴性,r=0.983,P＜O.01。
　　 4.脂聯(lián)素誘導(dǎo)AMPK磷酸化呈濃度依賴性Western blot顯示空白組無P-AMPK表達(dá),干預(yù)組隨著脂聯(lián)素濃度的升高AMPK的活性增強(qiáng)(r=0.889,P＜O.01)。5-40μg/ml的脂聯(lián)素作用于ASMCs48小時(shí)后,p-AMPK/AMPK比值分別為(27.22±2.77)％、(34.96±3.00)％、(70.95±