抵當(dāng)湯對(duì)高脂飲食胰島素抵抗大鼠平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：通過高脂飲食復(fù)制大鼠胰島素抵抗（IR）模型，觀察抵當(dāng)湯對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）增殖周期中G0/G1期、S期、G2/M期各期的細(xì)胞數(shù)量、增殖指數(shù)（PI）及細(xì)胞促凋亡基因Fas、抗凋亡基因Bcl-2的影響，旨在從分子、細(xì)胞及基因水平來探討抵當(dāng)湯防治以IR為病理基礎(chǔ)的心腦血管疾病的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供理論研究依據(jù)。抵當(dāng)湯出自于醫(yī)圣張仲景之手，由大黃、虻蟲、桃仁、水蛭四味藥物構(gòu)成。此方為主要治療太陽及陽明蓄血重證的經(jīng)典方劑，有

2、活血通絡(luò)、逐瘀攻下的作用。我們采用抵當(dāng)湯預(yù)防性干預(yù)IR大鼠模型，探討血管平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡的機(jī)制及調(diào)控的方法，為臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：⑴選用體重為180g-220g健康清潔級(jí)雄性Wistar大鼠，共35只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后，隨機(jī)分為5組：空白對(duì)照組(Ⅰ組)、模型組(Ⅱ組)、抵當(dāng)湯低劑量組(Ⅲ組)、抵當(dāng)湯高劑量組(Ⅳ組)、血脂康組(Ⅴ組)。每組各7只。⑵實(shí)驗(yàn)給藥:空白組喂普通飼料，其余各組喂高脂飼料?？瞻捉M與模型組每日

3、均灌胃蒸餾水（10ml/Kg）；抵當(dāng)湯低劑量組每日灌胃抵當(dāng)湯藥液1g生藥/Kg(此用藥量相當(dāng)于成人每日每公斤體重的10倍)；抵當(dāng)湯高劑量組每日灌胃抵當(dāng)湯藥液2g生藥/Kg(此用藥量相當(dāng)于成人每日每公斤體重的20倍)；血脂康組每日灌胃血脂康0.2g/Kg(此用藥量相當(dāng)于成人每日每公斤體重的10倍)。⑶指標(biāo)檢測(cè):喂養(yǎng)8w后,斷頭取血，測(cè)定血脂，空腹血糖、胰島素，進(jìn)而計(jì)算胰島素敏感指數(shù)、胰島素抵抗指數(shù)；留取胸主動(dòng)脈，剪去外膜附著組織，一部分置

4、于10％福爾馬林中固定，待觀察病理形態(tài)；一部分置于10%的乙醇中，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)平滑肌細(xì)胞增殖周期中各期的細(xì)胞數(shù)量及增殖指數(shù)；一部分置于4%的多聚甲醛中，待免疫組化SP法檢測(cè)凋亡基因Fas和Bcl-2的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：①與空白組相比，模型組 ISI降低(P<0.05)， HOMA-IR明顯升高（ P<0.01)；抵當(dāng)湯低劑量組、高劑量組與模型組比較， ISI明顯升高（P<0.01)，HOMA-IR明顯降低（P<0.01)

5、；抵當(dāng)湯低劑量組與高劑量組相比，低劑量組有優(yōu)于高劑量組的趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而抵當(dāng)湯低劑量組、高劑量組與血脂康組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明抵當(dāng)湯可以提高胰島素敏感性，改善胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)。②與空白組相比，模型組大鼠 TC、TG、LDL-C均升高(P<0.01)，而HDL-C明顯降低(P<0.01)；抵當(dāng)湯低劑量組與模型組相比，大鼠TC、TG、降低（P<0.01），LDL-C降低（P<0.05），而HDL-C明顯升高（P<0.01）；抵當(dāng)湯

6、高劑量組與模型組比較，大鼠 TC、TG、LDL-C均明顯降低（P<0.01)；而HDL-C明顯升高（P<0.01）；抵當(dāng)湯高劑量組與抵當(dāng)湯低劑量組相比，高劑量組有優(yōu)于低劑量組的趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；抵當(dāng)湯低劑量組與血脂康組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；抵當(dāng)湯高劑量組與血脂康組相比，TC降低（P<0.05）,TG、LDL-C有降低趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，HDL-C升高（P<0.05）。③與空白組相比，模型組G0/G1期比率明顯降低（P<0.01），而

7、S期和G2/M期比率明顯升高（P<0.01），PI明顯升高（P<0.01）；抵當(dāng)湯低劑量組與模型組比較，G0/G1期比率升高（P<0.05），S期比率明顯降低（P<0.01），G2/M期比率有下降趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，PI降低(P<0.05)；抵當(dāng)湯高劑量組與模型組比較，G0/G1期比率明顯升高（P<0.01），而S期和G2/M期比率明顯降低（P<0.01），PI明顯降低（P<0.01）；抵當(dāng)湯低劑量組與高劑量組相比，高劑量組有優(yōu)于低劑

8、量組的趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；抵當(dāng)湯低劑量組、高劑量組與血脂康組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明抵當(dāng)湯可以降低PI，從而抑制大鼠血管平滑肌細(xì)胞的增殖。④與空白組相比，模型組Fas表達(dá)明顯降低（P<0.01），Bcl-2表達(dá)升高（P<0.05）；抵當(dāng)湯低劑量組、高劑量組與模型組比較，F(xiàn)as表達(dá)明顯升高（P<0.01)，Bcl-2表達(dá)明顯降低（P<0.01)；抵當(dāng)湯低劑量組與高劑量組相比，高劑量組有優(yōu)于低劑量組的趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；抵當(dāng)湯低劑量組、

9、高劑量組與血脂康組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表明抵當(dāng)湯可以升高Fas表達(dá)水平，降低Bcl-2表達(dá)水平，從而促進(jìn)大鼠血管平滑肌細(xì)胞的凋亡。⑤空白對(duì)照組:主動(dòng)脈內(nèi)膜有單層完整的內(nèi)皮，內(nèi)皮下層有少量疏松結(jié)締組織。中膜平滑肌走行清晰，無增生；彈力纖維未見異常。模型組:內(nèi)膜明顯增厚，內(nèi)膜層可見內(nèi)皮有炎性細(xì)胞堆積，內(nèi)皮不完整，高低不平，內(nèi)皮下層明顯增厚，有大量排列紊亂的平滑肌纖維，中膜彈力纖維斷裂或紊亂，平滑肌增生明顯。抵當(dāng)湯低劑量組：內(nèi)膜內(nèi)皮完整，未見

10、炎性細(xì)胞但表面稍顯起伏不平整，內(nèi)皮下層略厚，可見少量平滑肌，彈力纖維排列未見明顯異常，中膜平滑肌略厚，部分彈力纖維波紋斷裂。抵當(dāng)湯高劑量組：內(nèi)膜內(nèi)皮完整連續(xù)，內(nèi)皮表面未見炎性細(xì)胞，內(nèi)皮下層很薄，未見明顯增生的彈力纖維和平滑??；中膜平滑肌厚度均勻，增生不明顯。血脂康組：內(nèi)皮完整，內(nèi)皮下層很薄，未見明顯增生的彈力纖維和平滑肌；中膜平滑肌走行清晰，厚度均勻，增生不明顯。
　　結(jié)論：⑴飼喂高脂飼料成功復(fù)制IR大鼠模型，證明高脂飲食可以引起