氧化苦參堿對(duì)高脂喂養(yǎng)胰島素抵抗大鼠腎臟纖維化的影響.pdf

1、目的：探討氧化苦參堿對(duì)高脂喂養(yǎng)所致胰島素抵抗大鼠腎臟纖維化的影響及其發(fā)生機(jī)制。
　　方法：對(duì)48只8周齡清潔級(jí)健康的雄性SD大鼠(180-220g)進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為2組：正常對(duì)照組(Con)12只和高脂飲食組(HF)36只。用普通飼料喂養(yǎng)Con組，高脂飼料喂養(yǎng)HF組。喂養(yǎng)8周后各組隨機(jī)抽取6只大鼠，進(jìn)行高胰島素-正葡萄糖鉗夾實(shí)驗(yàn)，留取血液及腎臟組織標(biāo)本。計(jì)算葡萄糖輸注率(GIR)，判定造模成功后，Con組剩余6只不變

2、，將剩余HF組大鼠隨機(jī)分為5組：高脂模型組(HF)、氧化苦參堿低劑量組(OMT-L)、氧化苦參堿中劑量組(OMT-M)、氧化苦參堿高劑量組(OMT-H)及吡格列酮組(Pio)，繼續(xù)喂養(yǎng)各組大鼠并分別給予相應(yīng)藥物干預(yù)10周。藥物干預(yù)10周后，處死大鼠，留取血清及腎臟標(biāo)本，測(cè)空腹血糖FBG、空腹血胰島素(FINS)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、糖化血紅蛋白(HbA1c)，應(yīng)用 Western Blot

3、檢測(cè)腎臟組織中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)、基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)及組織金屬蛋白酶抑制劑2(TIMP-2)的蛋白表達(dá)水平，ELISA試劑盒測(cè)腎組織Ⅳ型膠原蛋白水平， HE染色、電鏡觀察腎臟形態(tài)變化。
　　結(jié)果：
　　1.高脂喂養(yǎng)8周后，各項(xiàng)指標(biāo)變化：(1)體重及攝食量：兩組大鼠喂養(yǎng)8周后，HF組大鼠體重明顯高于Con組，但兩組間每日平均攝入熱量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(2)血清生化指標(biāo)：與Con組相比， HF組大鼠FBG、

4、FINS、BUN、Cr、TC、TG、HbA1c均顯著提高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)Ⅳ型膠原蛋白含量：與Con組相比，HF組大鼠腎臟組織中Ⅳ型膠原蛋白含量顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)高胰島素-正葡萄糖鉗夾實(shí)驗(yàn)：HF組大鼠的葡萄糖輸注率明顯低于Con組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.藥物干預(yù)10周后，6組大鼠各項(xiàng)指標(biāo)變化：(1)體重及攝食量：藥物干預(yù)10周后，HF組大鼠體重明顯高于正常對(duì)照組，OMT各組及Pio組的大鼠體重較高

5、脂組減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，較 Con組仍偏高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HF組大鼠每日平均攝食量較Con組明顯升高，而OMT各組及Pio組較正常對(duì)照組仍偏高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)血清生化指標(biāo)：與Con組相比，HF組大鼠FBG、BUN、Cr、TG、TC、HbA1c均顯著提高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。OMT各干預(yù)組及Pio組各項(xiàng)指標(biāo)較正常組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，較 HF組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)Ⅳ型膠原蛋白：與Con組相比，HF組大鼠腎

6、臟組織Ⅳ型膠原蛋白含量顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。OMT各干預(yù)組及Pio干預(yù)組較正常組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，較HF組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)腎臟 HE染色：經(jīng)光鏡高倍鏡(×400)觀察兩組大鼠腎組織切片可見，Con組腎小球及腎小管清晰可見，結(jié)構(gòu)正常。HF組出現(xiàn)了明顯的腎臟損害，HF組腎小管腫脹，細(xì)胞增生，腎小球體積縮小，基底膜增厚，系膜基質(zhì)增多，硬化明顯。OMT及 Pio組的上述異常明顯改善。(5)透射電鏡觀察腎組織：經(jīng)過1

7、0周藥物干預(yù)后，通過透射電子顯微鏡觀察各組大鼠腎組織，發(fā)現(xiàn) Con組腎小球結(jié)構(gòu)基本正常，足細(xì)胞足突排列整齊有規(guī)則。HF組可見腎小球足細(xì)胞足突結(jié)構(gòu)紊亂，廣泛融合甚至消失，細(xì)胞外基質(zhì)增多，基底膜明顯增厚且厚度不均。OMT及Pio組腎小球足細(xì)胞足突結(jié)構(gòu)仍不正常，但足突融合情況較HF組明顯減輕，細(xì)胞外基質(zhì)減少，但仍未恢復(fù)至 Con組的狀態(tài)。(6)腎臟纖維化指標(biāo)：與Con組相比，HF組TGF-β1、TIMP-2的蛋白表達(dá)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

8、，MMP-2的蛋白表達(dá)明顯下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；OMT各干預(yù)組及Pio干預(yù)組較HF組的TGF-β1、TIMP-2的蛋白表達(dá)下降，而 MMP-2的表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.高脂飲食成功誘導(dǎo)了胰島素抵抗大鼠的模型，表現(xiàn)為高胰島素血癥、高血脂、高血糖與胰島素抵抗。
　　2.氧化苦參堿可以改善糖代謝、脂代謝紊亂，減輕腎臟纖維化，改善腎臟功能。
　　3.氧化苦參堿可能是通過下調(diào)TGF-β1、TIM