苦參堿對(duì)大鼠胰島素瘤INS-1細(xì)胞活性、胰島素分泌及抗氧化能力的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、糖尿病是以高血糖為特征的代謝疾病，而高血糖是由于胰島素分泌缺陷或胰島素作用缺陷引起的。糖尿病的發(fā)病與多個(gè)因素有關(guān)，如遺傳、自身免疫、環(huán)境等。糖尿病的患病率呈逐年遞增的趨勢(shì)，并且發(fā)病趨向低齡化。糖尿病的治療和預(yù)防已提上日程，在中藥治療糖尿病方面也有很大的發(fā)現(xiàn)。已經(jīng)有研究發(fā)現(xiàn)苦參堿有降低血脂、保護(hù)肝臟、提高機(jī)體免疫力、抗炎等作用，我們實(shí)驗(yàn)室以前的實(shí)驗(yàn)表明苦參堿可明顯抑制高脂性肥胖大鼠體重的增加，保護(hù)肝臟功能，增強(qiáng)抗脂質(zhì)過(guò)氧化能力，調(diào)節(jié)糖脂代

2、謝紊亂。也有研究報(bào)道苦參堿可以降低四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的含量。至于苦參堿為什么能調(diào)節(jié)糖代謝紊亂、降低血糖及將苦參堿應(yīng)用于胰島細(xì)胞研究糖尿病的防治機(jī)制，目前尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。因此本實(shí)驗(yàn)將苦參堿應(yīng)用于體外培養(yǎng)的大鼠胰島素瘤INS-1細(xì)胞，以探討苦參堿調(diào)節(jié)糖代謝和降低血糖的作用機(jī)制。
　　 將體外培養(yǎng)的大鼠胰島素瘤INS-1細(xì)胞分為9組：①正常對(duì)照組；②苦參堿組；③鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)組；④苦參堿保護(hù)組；

3、⑤苦參堿修復(fù)組；⑥阿托品組；⑦阿托品+苦參堿組；⑧異搏定組；⑨異搏定+苦參堿組。INS-1細(xì)胞在培養(yǎng)板中培養(yǎng)24h后，觀察苦參堿對(duì)INS-1細(xì)胞的增殖活性、葡萄糖激發(fā)的INS-1細(xì)胞胰島素分泌量、苦參堿對(duì)INS-1細(xì)胞胰島素分泌量、苦參堿對(duì)STZ損傷的INS-1細(xì)胞的保護(hù)和修復(fù)作用以及苦參堿對(duì)STZ損傷的INS-1細(xì)胞的丙二醛(Malonaldehyde，MDA)和總抗氧化能力(Total Anti-Oxidation Competen

4、ce，T-AOC)水平的影響，流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)測(cè)定其凋亡。
　　 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((-x)±s)和百分?jǐn)?shù)表示，采用SPSS10.0軟件進(jìn)行單因素方差分析和X2檢驗(yàn)，分別P＜0.05、P＜0.01、P＜0.001被認(rèn)為差異有顯著性。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 一.苦參堿對(duì)INS-1細(xì)胞增殖活性的影響
　　 1.苦參堿單獨(dú)作用對(duì)INS-1細(xì)胞增殖活性的影響
　

5、　 與正常對(duì)照組相比，低、中、高濃度苦參堿可以明顯提高INS-1細(xì)胞的增殖活性(分別P＜0.001，P＜0.05)。
　　 2.苦參堿對(duì)STZ損傷的INS-1細(xì)胞的增殖活性的影響
　　 與正常對(duì)照組相比，STZ組INS-1細(xì)胞增殖活性明顯降低(P＜0.001)；保護(hù)組低、中、高濃度苦參堿使INS-1細(xì)胞增殖活性明顯降低(分別P＜0.001，P＜0.01)；修復(fù)組高濃度苦參堿使INS-1細(xì)胞增殖活性明顯降低(P＜0.00

6、1)，修復(fù)組低、中濃度苦參堿對(duì)INS-1細(xì)胞增殖活性無(wú)明顯影響。與STZ組相比，保護(hù)組低、中濃度苦參堿使INS-1細(xì)胞增殖活性明顯增高(分別P＜0.05，P＜0.001)，保護(hù)組高濃度苦參堿對(duì)INS-1細(xì)胞增殖活性無(wú)明顯影響；修復(fù)組的低、中、高濃度苦參堿使INS-1細(xì)胞增殖活性明顯增高(均P＜0.001)。
　　 3.苦參堿對(duì)阿托品作用的INS-1細(xì)胞的增殖活性的影響
　　 與正常對(duì)照組相比，阿托品組INS-1細(xì)胞增殖活

7、性沒(méi)有明顯變化；阿托品+苦參堿低、中濃度的INS-1細(xì)胞增殖活性明顯增高(分別P＜0.05，P＜0.001)；阿托品+苦參堿高濃度的INS-1細(xì)胞增殖活性無(wú)明顯變化。與阿托品組相比，阿托品+苦參堿低、中濃度的INS-1細(xì)胞增殖活性明顯增高(分別P＜0.01，P＜0.001)；阿托品+苦參堿高濃度的INS-1細(xì)胞增殖活性沒(méi)有明顯變化。
　　 4.苦參堿對(duì)異搏定作用的INS-1細(xì)胞增殖活性的影響
　　 與正常對(duì)照組相比，異搏

8、定組INS-1細(xì)胞增殖活性明顯降低(P＜0.05)；異搏定+苦參堿低、中、高濃度組INS-1細(xì)胞增殖活性沒(méi)有明顯改變。與異搏定組相比，異搏定+苦參堿低濃度組INS-1細(xì)胞增殖活性明顯升高(P＜0.05)；異搏定+苦參堿中、高濃度組的INS-1細(xì)胞增殖活性沒(méi)有明顯改變。
　　 二.不同濃度的葡萄糖對(duì)INS-1細(xì)胞胰島素分泌的影響
　　 與正常對(duì)照組相比，5.6mmol/L和33.6 mmol/L濃度的葡萄糖對(duì)INS-1細(xì)胞

9、胰島素分泌量無(wú)明顯變化；8.4mmol/L、11.2mmol/L、16.8 mmol/L和22.4 mmol/L濃度葡萄糖使INS-1細(xì)胞胰島素分泌量明顯增多(分別P＜0.05，P＜0.001)。
　　 三.苦參堿對(duì)INS-1細(xì)胞胰島素分泌的影響
　　 1.苦參堿單獨(dú)作用對(duì)INS-1細(xì)胞的胰島素分泌的影響
　　 與距常對(duì)照組相比，苦參堿低、中、高濃度組INS-1細(xì)胞胰島素分泌量明顯增加(分別P＜0.001，P＜0

10、.05)。
　　 2.苦參堿對(duì)阿托品作用的INS-1細(xì)胞的胰島素分泌的影響
　　 與正常對(duì)照組相比，阿托品組INS-1細(xì)胞胰島素分泌量明顯降低(P＜0.05)；阿托品+苦參堿低、中、高濃度組INS-1細(xì)胞胰島素分泌量沒(méi)有明顯變化。與阿托品組相比，阿托品+苦參堿低、中濃度組INS-1細(xì)胞胰島素分泌量明顯增高(P＜0.05)；阿托品+苦參堿高濃度組INS-1細(xì)胞胰島素分泌量沒(méi)有明顯變化。
　　 3.苦參堿對(duì)異搏定作用

11、的INS-1細(xì)胞的胰島素分泌的影響
　　 與正常對(duì)照組相比，異搏定組INS-1細(xì)胞胰島素分泌量明顯降低(P＜0.05)；異搏定+苦參堿高濃度組INS-1細(xì)胞胰島素分泌量明顯降低(P＜0.05)；異搏定+苦參堿低、中濃度組INS-1細(xì)胞胰島素分泌量無(wú)明顯變化。與異搏定組相比，異搏定+苦參堿低濃度組INS-1細(xì)胞胰島素分泌量明顯增高(P＜0.01)；異搏定+苦參堿中、高濃度組INS-1細(xì)胞胰島素分泌量沒(méi)有明顯變化。
　　 四

12、.苦參堿對(duì)STZ損傷的INS-1細(xì)胞的胰島素分泌的影響
　　 與正常對(duì)照組相比，STZ組INS-1細(xì)胞胰島素分泌量明顯減少(P＜0.001)；保護(hù)組苦參堿低、中、高濃度組INS-1細(xì)胞胰島素分泌量沒(méi)有明顯改變；修復(fù)組苦參堿低、中、高濃度組INS-1細(xì)胞胰島素分泌量明顯降低(分別P＜0.05，P＜0.01)。與STZ組相比，保護(hù)組苦參堿低、中、高濃度組INS-1細(xì)胞胰島素分泌量分別明顯增多(分別P＜0.01，P＜0.001)；修復(fù)

13、組苦參堿低濃度組INS-1細(xì)胞胰島素分泌量明顯增多(P＜0.05)，修復(fù)組中、高濃度組INS-1細(xì)胞胰島素分泌量沒(méi)有明顯改變。
　　 五.苦參堿對(duì)STZ損傷的INS-1細(xì)胞的MDA和T-AOC的影響
　　 1.苦參堿對(duì)STZ損傷的INS-1細(xì)胞的MDA的影響
　　 與正常對(duì)照組相比，STZ組INS-1細(xì)胞MDA含量明顯增高(P＜0.001)；保護(hù)組低、中、高濃度苦參堿使INS-1細(xì)胞MDA含量明顯增高(分別P＜0

14、.05，P＜0.01，P＜0.001)；修復(fù)組低、中、高濃度苦參堿使INS-1細(xì)胞MDA含量明顯增高(分別P＜0.01，P＜0.001)。與STZ組相比，保護(hù)組低、中濃度苦參堿組使INS-1細(xì)胞MDA含量明顯降低(分別P＜0.05，P＜0.01)，保護(hù)組高濃度苦參堿組INS-1細(xì)胞MDA含量沒(méi)有明顯改變；修復(fù)組苦參堿低、中濃度苦參堿組INS-1細(xì)胞MDA含量明顯降低(分別P＜0.05，P＜0.01)，修復(fù)組高濃度苦參堿組INS-1細(xì)胞M

15、DA含量沒(méi)有明顯改變。
　　 2.苦參堿對(duì)STZ損傷的INS-1細(xì)胞的T-AOC的影響
　　 與正常對(duì)照組相比，STZ組INS-1細(xì)胞T-AOC明顯降低(P＜0.05)；保護(hù)組低濃度苦參堿組INS-1細(xì)胞T-AOC明顯增高(P＜0.05)，保護(hù)組中、高濃度苦參堿組INS-1細(xì)胞T-AOC沒(méi)有明顯變化；修復(fù)組低、中濃度苦參堿組INS-1細(xì)胞T-AOC明顯增高(P＜0.01)，修復(fù)組高濃度苦參堿組INS-1細(xì)胞T-AOC沒(méi)有

16、明顯變化。與STZ組相比，保護(hù)組低、中濃度苦參堿組INS-1細(xì)胞T-AOC明顯增高(P＜0.001)，保護(hù)組高濃度苦參堿組INS-1細(xì)胞T-AOC沒(méi)有明顯變化；修復(fù)組低、中濃度苦參堿組INS-1細(xì)胞T-AOC明顯增高(P＜0.001)，修復(fù)組高濃度苦參堿組INS-1細(xì)胞T-AOC沒(méi)有明顯變化。
　　 六.細(xì)胞形態(tài)及流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果
　　 1.細(xì)胞形態(tài)
　　 鏡下觀察，正常對(duì)照組細(xì)胞透亮，形狀規(guī)則，呈梭形或多角形，貼

17、在培養(yǎng)板壁上；STZ組視野中細(xì)胞數(shù)目明顯減少，細(xì)胞從培養(yǎng)板壁落下或半貼壁狀態(tài)，細(xì)胞呈球形；保護(hù)組和修復(fù)組低、中、高濃度苦參堿組視野中INS-1細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞從培養(yǎng)板壁上脫落或半貼壁，細(xì)胞呈球形。保護(hù)組和修復(fù)組苦參堿各濃度組與STZ組比較INS-1細(xì)胞數(shù)量、形態(tài)沒(méi)有明顯改變。
　　 2.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果
　　 與正常對(duì)照組相比，STZ組處于G1期細(xì)胞數(shù)減少，幾乎沒(méi)有處于G2期的細(xì)胞，S期細(xì)胞數(shù)增多，凋亡細(xì)胞數(shù)增多；苦參堿

18、(10-6mol/L)+STZ組處于G1期細(xì)胞數(shù)減少，幾乎沒(méi)有處于G2期的細(xì)胞，S期細(xì)胞數(shù)增多，凋亡細(xì)胞數(shù)增多。與STZ組相比，苦參堿(10-6mol/L)+STZ組處于G1期細(xì)胞減少，G2期細(xì)胞和STZ組相同，S期細(xì)胞增多，凋亡細(xì)胞比STZ組明顯減少。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：苦參堿可以提高INS-1細(xì)胞的增殖活性，并促進(jìn)其分泌胰島素；苦參堿可以對(duì)抗阿托品、異搏定降低INS-1細(xì)胞增殖活性和抑制胰島素分泌的作用；苦參堿可以提高ST